當前位置:律師網大全 - 商標註冊 - 如何制作QPCR的標準曲線

如何制作QPCR的標準曲線

QPCR-ELISA可以制作QCPR的標準曲線。

詳情如下:

PCR-ELISA方法:

使用地高辛或生物素作為標記引物,擴增產物被固相板上的特異性探針結合。

然後加入抗地高辛或生物素化抗體-辣根過氧化物酶偶聯物,最後酶使底物顯色。

常規的PCR-ELISA只是定性實驗,加入內標,制作標準曲線也可以達到定量檢測的目的。

通過測量壹系列已知成分的標準物質的某種理化性質,得到由該性質的數值組成的曲線。

擴展數據:

實時熒光定量PCR技術,在PCR反應體系中加入熒光基團,通過熒光信號的積累實時監控整個PCR過程,最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析。

檢測方法:

1,SYBRGreen法:

在PCR反應體系中加入過量的SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地混入DNA雙鏈中,然後發出熒光信號。

而沒有摻入鏈中的SYBR染料分子不會發出任何熒光信號,從而保證了熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。

SYBR定量PCR擴增熒光曲線,PCR產物解鏈曲線(單峰圖表示PCR擴增產物的奇異性)。

2.TaqMan探針法:

當探針完整時,報告基團發出的熒光信號被淬滅基團吸收;

在PCR擴增過程中,Taq酶的5’-3’核酸外切酶活性降解探針,並將報告熒光基團與淬滅熒光基團分開,使得熒光監測系統可以接收熒光信號。

即每壹條DNA鏈都被擴增,形成壹個熒光分子,實現了熒光信號的積累和PCR產物的形成之間的完全同步。

將PCR反應第壹個15循環的熒光信號作為熒光背景信號,默認設置熒光閾值為3-15循環熒光信號標準差的10倍,即閾值= 10 * sdcycle3-15。

使用已知初始拷貝數的標準品可以制作標準曲線,其中橫坐標代表初始拷貝數的對數,縱坐標代表Ct值。因此,只要獲得未知樣本的Ct值,就可以從標準曲線計算出樣本的初始拷貝數。

參考資料:

百度百科-實時熒光定量

百度百科-標準曲線

  • 上一篇:如何評價壹個優質商標
  • 下一篇:KID STEAM註冊過商標嗎?還有哪些分類可以註冊?
  • copyright 2024律師網大全