2.通過改變熱循環，可以起到壹點作用。我的方法是50-60C放大10倍，延伸時間設為AC和BD；接下來，將退火溫度直接升高到72C，通過兩步法進行30次擴增，並將延伸時間設定為AD的延伸時間。雖然還是沒有得到理想的結果，但是最多的碎片還是AC和BD，長的碎片非常非常弱。
3.正如Mybbff版主所說，我也試著調整了引物濃度。我看過韓健的專利技術TEM-PCR，其中的關鍵點是調整引物濃度實現片段富集。結合溫度變化，把B和C的濃度降到很低，我做到了A和D，B和C相差50倍..我的想法是把BC的濃度調整到壹個很低的水平，讓它在對數擴增期之前耗盡，只允許TM非常高的引物延伸下壹個72C。
4.目前我還沒有得到理想的結果，長碎片的量也遠不如AC和BD。我的想法是在設計引物和重疊區域的時候要多加註意。引物在TM值上壹定差距很大，a，d >；b、C、A、D引物稍長。符合這些變化，然後調整程序，我相信會成功的。