作 者劉子傑 翁亞光 李素彥 施瓊 蔡燕 劉斌 張燕 閻琛
機 構重慶醫科大學醫學檢驗系臨床檢驗診斷學省部***建教育部重點實驗室重慶市重點實驗室,重慶400016
刊 名《中國生物工程雜誌》 2009年第29卷第4期,28-34頁
關鍵詞CENP-E Mps1 蛋白質相互作用 熒光***振能量轉移
文 摘目的：探索與Mps1蛋白有相互作用的CENP-E蛋白結構域。方法：將重組質粒pEGFP-CENPE2（674～1085位氨基
酸）、pEGFP-CENPE3（1200～2134位氨基酸）轉染人胚腎293（HEK293）細胞,采用受體漂白熒光***振能量轉移方法（FRET方
法）,檢測EGFP-CENPE2、EGFP-CENPE3和Mps1間的能量轉移率（Ef）,進壹步用免疫***沈澱方法驗證FRET的實驗結果。結果：重
組質粒轉染HEK293細胞後經激光***聚焦顯微鏡觀察重組質粒表達的融合蛋白與Mps1都存在著***定位;FRET檢測結果顯示EGFP-CENPE3和
Mps1間的能量轉移率為[（12.63±0.48）%,n=30],pEGFP-CENPE2和Mps1間的能量轉移率為
[（3.07±0.21）%,n=30],與對照組[（2.96±0.27）%,n=30]比較pEGFP-CENPE3和Mps1間的能量轉移率差異存
在顯著性（p〈0.05）,免疫***沈澱實驗結果顯示EGFP-CENPE3與Mps1蛋白間存在相互作用。結論：FRET技術和免疫***沈澱實驗證明了
EGFP-CENPE3與Mps1間存在著相互作用。