染色
(1)初始染色
加入壹滴草酸銨結晶紫約1min，用水洗。
(2)媒染
滴加碘溶液洗去殘留的水，染色約65438±0分鐘，水洗。
(3)脫色
沖洗掉白色背景的載玻片上的水，用95%的酒精滴註，直到流出的酒精剛好不出現紫色，約20-30秒，立即用水沖洗掉酒精。
(4)雙重染色
用藏紅花溶液將1-2分鐘染色，然後用水清洗。
(5)顯微鏡檢查
幹燥後，用油鏡觀察。革蘭氏陰性菌為紅色，革蘭氏陽性菌為紫色。基於分散細菌的革蘭氏染色反應，過於密集的細菌往往是假陽性。
(6)以相同的方式，將大腸桿菌和枯草芽孢桿菌混合在載玻片上用於革蘭氏染色比較。
註意:染色時間要嚴格控制。關鍵是要嚴格掌握酒精脫色的度。脫色過度，可將陽性菌誤染為陰性菌。脫色不夠時，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，細菌的年齡也影響染色結果。比如陽性細菌培養時間過長，或者已經死亡，部分細菌自行溶解，往往是陰性。