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醫學檢驗,APTT、T T、PT、分別是用什麽檢測的?

凝血功能套餐不止PT、TT、APTT還有FIB有些大醫院還要加壹項國際敏感度指數(international sensitivity index,ISI),以確保PT的標準化。測定方法有很多:手工法,半自動,全自動,所需方法還要和當下條件相符才行,有專賣試劑的廠家,像亞中啊,金域啊,多得很,有官方網址,百度上可以查到的~以下所說,僅供參考: 凝血酶原時間(PT)的推薦方法

[原理]

將組織凝血活酶(主要含組織因子和脂質)和鈣離子,加到枸櫞酸抗凝血漿中,在37℃保溫,測定血漿凝固時間,即為PT。PT主要用於篩選檢測外源凝血系統的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗。

[標本來集和處理]

1、標本采集:用矽化或塑料註射器抽取空腹靜脈血,按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的矽化或塑料試管中,輕輕混合均勻。

2、標本處理:以2000~2500g,離心15分鐘,分離乏血小板血漿,並在24小時內完成試驗。

3、正常對照血漿:選擇正常健康男性和女性各lO名以上,年齡在18~45歲。但不能是妊娠、月經期、哺乳期和口服避孕藥的婦女,采取的血漿冰凍幹燥保存或-80℃保存。

[試劑]

1、抗凝劑:109mmol/L枸櫞酸鈉液(相當於含二分子結晶水的枸櫞酸鈉32g/L)。

2、凝血活酶試劑:市售商品,應標有ISI、批號及有效期。凍幹者應按說明書加指定的緩沖稀釋劑復溶。

3、氯化鈣(CaCl2)溶液:為25mmol/L。(目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好,可不必另配CaCl2液)。

4、質控物:正常及異常對照血漿

5、配制試劑用水必須符合1級純水的標準。

[儀器]

1、手工法:秒表,保持37℃±1℃的恒溫水浴箱或電熱塊。水深能浸試管3cm以上,表面無劃痕的10×mm拭管。經標準的0.1mL移液管。經校正的秒表。

2、儀器法:各種自動或半自動血凝儀,嚴格按說明書操作。

[操作步驟]

1、手工法

(1)測定溫度36.5~38.5℃,上述各試劑及被測血漿,均應預溫至此壹溫度,但凝血活酶試劑預溫不可超過30分鐘,血漿預溫壹般不宜超過10分鐘。

(2)所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或矽化玻璃管。

(3)吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL,加入壹小試管中:加入凝血活酶試劑0.1mL混勻後置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL,(也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合,加入0.2mL)。立即混勻並開動秒表:試管仍浸於水浴中,至約10秒鐘時,自水浴中取出,在紗布上迅速擦去試管外水滴,在明亮處不斷傾斜試管,在流動狀態下觀察有無纖維蛋白形成。壹旦見到纖維蛋白(同時將出現液體流動減慢),立即停表,記錄時間。每次測定二管,按平均數報告。本試驗的最後混合液其pH應為7.2~7.3,大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配制。

(4)每批均同時做正常和異常對照,方法應與測定標本完全相同。

[報告方式]

1、以PT的秒(S)數報告(最接近的0.5秒)

2、以患者血漿(S)/正常對照PT(S)的比率(PRT)報告。

3、在口服華法令類抗凝藥物治療監控時,應報告國際正常化比率(INR)。大部分自動化儀器可根據所測的PTR和凝血活酶試劑的ISI,自動算出INR。手工法可根據下列公式,用壹計算器直接計算:

Poller設計了壹個簡便的列線圖,在取得PTR和ISI值後,即可從圖上直接查找出INR值,十分便利,國內已有介紹。

ICSH規定,不再用稀釋曲線或百分比(活動度)報告。

[參考值]

因儀器/試劑不同,會得出不同結果,故很難統壹規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件,自行測定壹批健康人,建立參考值。此後至少每年或當條件有變化時,根據新的條件,重新建立。參考值PT測定的壹切條件均應與患者血漿PT測定相同(包括采血、容器、抗凝劑等)。健康供血者應選至少20個18~55歲的男性和非妊娠、月經期女性,不可服藥,在平靜休息狀態采血、以減少個體差異(有條件時,可測壹批老年人和小兒,分開統計)。同時應分開幾天采血和測定,以減少天間差異。測定結果經統計學處理,計算標準差:以兩個標準差(2SD)或95%可信限作為參考範圍。對於三個標準差是正常還是異常,需結合具體情況進行評估。從統計學上講,其中有些人是正常的。用以上標準,病人(PT異常)則很少會遺漏。

三、活化部分凝血活酶時間(APTT)的標準化

(壹)活化部分凝血活酶時間(APTT)的標準化

APTT是檢測內源凝血系統諸凝血因子缺陷和相關抑制物的篩選試驗,也是當前用於凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質檢測的主要手段。

與PT測定壹樣,不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質的敏感性相差很大。例如,檢測APTT的試劑中,所用活化劑(白陶土、矽藻土、鞣花酸)不同,他們對檢測肝素、狼瘡抗凝物質和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。

迄今,ICSH和ICTH尚未有APTT檢測方法標準化或試劑標準化的可行方案問世,僅NCCLS於1992年,提出壹個編號為H29-T的暫行方案。

(二)活化的部分凝血活酶時間(APTT)的推薦方法

[原理]

將壹種磷脂和激活劑加到血漿中,經過孵育後,加入適當濃度的鈣離子。其纖維蛋白凝塊形成的時間(以秒計),即為APTT。本法主要用於過篩測定內源途徑凝血因子的缺陷,如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽釋放酶原(PK)、高分子量激肽原(HMWK)以及纖維蛋白原等。同時也用於上述因子的抑制物測定、肝素治療的監測以及狼瘡抗凝因子的檢查。

[儀器]

本實驗所用儀器、設備(包括采血、貯血容器、加樣裝置和標本的處理等)以及對它們的要求完全與PT相同。PT所用自動化儀器同樣適於本實驗。

[試劑]

1、部分凝血活酶試劑:由商品供應。壹般已與檄活劑按比例配在壹起(或分開配制)常用的激活劑由矽藻土(商品名Celite)、白陶土、二氧化矽微粒、鞣化酸(ellagic acid)或其它可用的激活劑,由廠方配套供應。

APTT試劑/儀器結合,應能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低於0.3μ/mL(或<30%)的血漿,出現異常延長的結果。

2、氯化鈣溶液(25mmol/L)以及其它試劑與PT所用者相同。

[操作步驟]

1、樣品的采取、貯存、輸送與PT測定相同。註意,應用清潔的塑料或矽化玻璃采血器采血及貯血。

2、標本(去血小板的血漿)的制備與PT相同。註意、應用去血小板血漿測定。

3、水浴箱或電熱板的溫度為37℃±1℃,要經常檢查是否正確。

4、接觸活化時間:加激活劑活化因子Ⅻ的時間要保持壹致;各儀器和試劑生產廠家的規定可能不壹樣,應嚴格按說明書要求進行。手工操作時,應用秒表或類似的定時裝置計時。

5、操作:預溫(不超過30分鐘)APTT試劑壹份與預溫(不超過10分鐘)的侍測血漿壹份混合,立即開動秒表計時;至規定的接觸活化時間終點時,加人預溫37℃的CaCl2液壹份,混勻,同時開動秒表。至出現血漿凝固時,停表,記錄血漿凝固時間(以秒計)。手工測定時應同時測定兩管,按平均數報告。壹些精密度已有很大改進的自動或半自動凝血儀,如果有適當的質控標準也可只測定壹次。應同時測定正常和異常對照血漿。 不好意思TT著實沒找到,不過聯系到權威廠家,應該就不用自己去找了~

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