根據外源基因導入的方法和對象的不同,制作轉基因動物的方法主要有顯微註射法、反轉錄病毒法、胚胎幹細胞(embryonic stem cell,ES細胞)法、電脈沖法、精子載體導入法等。
1、顯微註射
是最常用且成功率較高的方法。基因顯微註射法的特點是外源基因的導入整合效率較高,不需載體,直接轉移目的基因,目的基因的長度可達lOOkb(10萬個堿基對)。
它可直接獲得純系,所以實驗周期短。但需要貴重精密儀器,技術操作難度大,並且外源基因的整合位點和整合的拷貝數都無法控制,易造成宿主動物基因組的插入突變,引起相應的性狀改變,重則致死。
2、反轉錄病毒感染法
該法整合率較高,目的基因不易破壞,多是單拷貝、單位點整合,適合於難以觀察到原核的禽類受精卵。由於病毒衣殼大小的限制,目的基因不宜超過10kb,否則影響活性和穩定。此外,病毒DNA可能影響外源基因在宿主動物的表達。
3、胚胎幹細胞法
胚胎幹細胞(ES細胞)指從囊胚期的內細胞團中分離出來的尚未分化的胚胎細胞,具有發育全能性,能進行體外培養;擴增、轉化和制作遺傳突變型等遺傳操作。
本法外源基因整合率高,植入囊胚前篩選合適的轉化的ES細胞,克服了以前只能在子代選擇的缺點,並能充分利用分子生物學發展起來的各種先進方法,是很有前途的技術。缺點是不易建立ES細胞系。並且由於通過嵌合體途徑,所以實驗周期長。
4、電脈沖法
電脈沖法(electroporation)又稱電穿孔法,是將供體DNA與受體細胞充分混勻,在外界的高電壓短脈沖下改變細胞膜結構,使細胞膜產生瞬間可逆性電穿孔,從而使壹定大小的DNA可以通過細胞膜進入細胞,運送到細胞核。
5、精子導入法
利用精子作為外源基因載體,借助受精作用把外源基因導入受精卵,整合到受精卵的基因組中,稱之為精子載體導入法,是構建轉基因動物的壹種新嘗試。
該法簡單、方便,依靠生理受帶過程,免去了對原核的損傷。但在實踐中成功率較低,對於精子是否可作為外源DNA載體也存在爭論。這項技術尚處在探索階段。該法可以將人工授精、體外受精與轉基因結合起來。
安全管理
在我國,先後頒布了《農業轉基因生物安全管理條例》?、《農業轉基因生物安全評價管理辦法》等法律法規。在管理範圍、安全性評價、管理措施等方面做了壹系列規定,以確保使用安全。
轉基因技術正在領導壹場新的農業科技革命。我國公眾對轉基因技術和轉基因食品還存在壹些疑慮,應該采用多種形式進行普及生命科學知識的教育,使公眾對轉基因技術有壹個較為科學的認識,主動地接受轉基因食品。使轉基因技術貼近民眾,造福於人類。
以上內容參考:百度百科-轉基因動物、百度百科-動物轉基因技術