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關於微量紫外分光光度計的NanoDrop的問題

壹、產品應用

ND-2000是目前國內外實驗室中使用最為廣泛的壹款微量分光光度計,其優越的性能、準確的結果贏得了廣大用戶的好評。

該產品可用於以下幾個方面:

* 紫外檢測:常規紫外光波長下檢測樣品吸光值;

* 核酸檢測:可檢測dsDNA、ssDNA、RNA等不同類型核酸的濃度及其在260nm、280nm處的吸光值;

* 探針檢測:檢測熒光標記探針的吸光值,可用於去除未能標記探針的樣品;

* 細胞培養物檢測:檢測細胞培養物在600nm處的吸光值;

* 蛋白檢測:檢測普通純化後蛋白的濃度和280nm處的吸光值;

* 蛋白標記檢測:可檢測被BCA、Bradford或Lowry標定的蛋白樣品,自動畫出標準曲線並計算出待測蛋白質濃度。

二、 產品簡介

NanoDrop 2000超微量分光光度計是NanoDrop的最新產品,應用液體的表面張力特性,樣品體積只需要 0.5~2ul,在檢測臺上,經上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細管等耗材檢測吸收值的優點。此產品設計受專利保護,並在全世界廣受歡迎,其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究。

NanoDrop 2000使用高能量氙燈(pulsed xenon flash lamp)可提供190~840nm的全光譜檢測,且不需要暖機,開機後立即使用。搭配高感度CCD array檢測器,檢測吸收值可高達300Abs(dsDNA濃度2~15000ng/ul),大部分純化後的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測。

待測樣品的均質性是NanoDrop 2000的最高要求,壹般核酸、蛋白質樣品能在檢測前以vortex mixer震勻為最佳,若無vortex mixer也應以pipette吸放數次混勻。若擔心genomic DNA可能因前述動作而斷裂,則改以55?C加熱約壹分鐘,使樣品在偵測前呈現均勻狀態,以確保 2ul 具有代表性。

檢測時選擇不同檢測模式,可以得到最快速的結果:

● Nucleic Acid ?C 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。

● UV-Vis ?C 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜(以1mm光徑吸收值呈現)。

● A280蛋白質定量法 ?C 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio及蛋白質濃度。僅適用於純化後的蛋白質,須具有已知的質量消光系數(mass extinction coefficient)方可計算。

● BCA、Bradford及Lowry ?C 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結果,自動畫出標準曲線並計算R square,待測蛋白質濃度。

* 蛋白質檢測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑,因呈色劑隨時間會逐漸加深,使用前請詳閱試劑說明書並制備不同濃度的標準品,在最佳時間內完成檢測,以得到良好的標準曲線。每個標準曲線最多可有七個標準品,每個標準品最多可做五重復。

* 測蛋白質時樣品體積需使用 2ul,每個樣品檢測後需以Kimwipes 低塵擦拭紙(編號: 34155 )擦拭15~20回,以避免呈色劑與蛋白質的殘留。

濃度範圍:

樣品種類

最低濃度

最高濃度

(超過時請稀釋樣品)

再現性 (五重復以上)

核酸

2 ng/ul

15000 ng/ul (dsDNA)

12000 ng/ul (RNA)

濃度範圍在 2-100 ng/ul 時,SD為 ± 2 ng/ul

濃度範圍大於 100 ng/ul 時,CV為 ± 2%

純BSA

0.10 mg/ml

100 mg/ml

濃度範圍在 0.05-10 mg/ml 時,SD為 ± 0.10 mg/ml

濃度大於 10 mg/ml 時,CV為 ± 2%

蛋白質,以BCA方式定量

0.2 mg/ml

8.0 mg/ml

CV:± 2% (在可偵測的濃度範圍內皆然)

蛋白質,以modified Lowry方式定量

0.2 mg/ml

4.0 mg/ml

CV:± 2% (在可偵測的濃度範圍內皆然)

蛋白質,以Bradford方式定量

100 ug/ml

8000 ug/ml

濃度範圍在 100-500 ug/ml 時,SD為 ± 25 ug/ml

濃度大於 500 ug/ml 時,CV為 ± 5%

蛋白質,以Mini Bradford方式定量

15 ug/ml

100 ug/ml

濃度範圍在 15-50 ug/ml 時,SD為 ± 4 ug/ml

濃度大於 50 ug/ml 時,CV為 ± 5%

三、技術參數:

1、波長範圍: 190-840nm;

2、波長精度: 1nm;

3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm);

4、其它: 1mm光程長度(可自動調整到0.05mm);

5、檢測下限:2ng/μl(dsDNA);

6、檢測上限:15000ng/μl(dsDNA);

7、吸光率精確度:0.002 absorbance (1mm光程);

8、吸光率準確性:2%(at 0.76 at 257 nm);

9、吸光率範圍:0.02-300 (相當於10mm光程);

10、核酸檢測周期:< 5s;

11、體積:14cm×20cm。

四、使用方法舉例:

dsDNA:在主畫面點選Nucleic Acid,計算機與儀器自動完成聯機。依照DNA所溶於之液體準備該溶液(務必確認DNA溶於二次水、TE buffer或哪壹組kit的elution buffer)取出1.5 ul 點在偵測臺上,放下上臂後再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50,在Sample ID位置輸入樣品名稱,將樣品混勻,取出1.5 ul 點在偵測臺上,放下上臂後再按Measure。

五、結果整理:

NanoDrop2000 軟件在偵測壹開始會詢問檔案欲存至何處,若未指定,則檔案會存在上壹個使用者的檔案內。

六、註意事項:

1. 偵測後立即使用拭鏡紙(Kimwipe類)擦拭臺面。先取壹張將上下臺面的液體吸走,再將此laboratory wipe吸過樣品的面反折到內部,折叠四次後以單方向多次擦拭臺面(DNA 擦 5次,Protein 擦 20次)。

2. 同壹滴液體只能做壹次偵測,欲重復定量同壹樣品,請擦掉前壹滴,重新取出壹滴進行偵測。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測量,隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求,原則上不超過 2ul。並請使用2ul pipette避免體積不足導致液柱無法完整形成。唯蛋白質樣品因呈色劑與蛋白質本身特性,務必使用2ul進行偵測。

4. 當軟件跳出錯誤訊息時,請詳細閱讀並依指示進行障礙排除。最常發生的情形是在偵測過程液柱並未正確形成,軟件會出現以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下臺面,或樣品內有泡泡,將上臂拉起後,擦掉該滴樣品,再重新進行偵測,必要時可將樣品體積加大至2ul。

5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之腐蝕樣品,其它無腐蝕性之液體皆可使用。

品牌:

NanoDrop 2000c

同壹儀器整合了NanoDrop 2000 的所有特性以及比色皿功能

高級微底座座技術

雙模式——選擇比色皿或基座

更寬的濃度範圍,可以測量很低或很高的濃度

比色皿功能可以進行動力學(時間或時間/溫度研究)和細胞培養(OD 600)測量

加熱: 37°C,±0.5°C

攪拌: 150至850rpm

Z-高度: 8.5mm

比色皿尺寸: 12.5 mm x 12.5mm,最高48mm

光程: 10、5、2和1mm

類型: 屏蔽比色皿

吸收範圍: 0.008至1.5

測量時間: <3秒

重量: 2.1kg

UL/CSA 和CE

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