對於許多分子生物學和基因組學應用，從克隆和PCR到基因組測序和芯片分析，DNA純化是唯壹的方法。然而，選擇最好的凈化套件並不容易。例如，當您純化基因組DNA時，您需要壹個可以溫和地處理核酸而不分離質粒DNA的試劑盒。而且新壹代測序技術對樣本的要求很高，我們也需要壹些特殊的產品來純化DNA。這裏，我們介紹壹些新的選項。鹽沈澱法震中master pure(Illumina子公司Illumina)？CompleteDNAPurificationKit采用專利的鹽沈澱法。該系列試劑盒涵蓋各種樣品類型，包括血液、固定組織、植物、酵母、昆蟲等。，可以在短短30分鐘內帶來核酸的高產量而損失很少。據Epicentre高級產品經理CristineKinross介紹，使用這些試劑盒，用戶在為測序或其他分子生物學應用準備樣品之前，不需要進行額外的純化。它們可以去除蛋白質和其他細胞碎片，而不會引入必須去除的有毒化合物，從而避免重復洗滌並提高核酸產量。金羅斯說:“MasterPure回收的核酸純度極佳，可以讓樣本直接進入測序文庫的制備。”當然，它也適用於其他應用，包括芯片、qPCR和克隆。此外，該試劑盒也可用於RNA純化。獲得總核酸後，通過DNA酶處理可以獲得總RNA。各種試劑盒Promega提供了各種核酸純化試劑盒，使用幾種不同的策略。比如巫師？GenomicDNAPurificationKit基於經典沈澱法，可以靈活高效地從全血、組織培養細胞、動植物組織、酵母和細菌中提取基因組DNA。ReliaPrep呢？該系列試劑盒采用柱提取法，簡單快速。此外，Promega還提供了基於磁珠純化的試劑盒。Promega基因組學全球產品經理EricVincent表示:“盡管溶液的確切組成會有所不同，但裂解、結合、洗滌和洗脫的基本過程適用於不同的結合方法(如矽膠或纖維素)、不同的純化形式(純化柱或磁珠)，以及手動和自動純化操作。”對於壹些非常重要的樣品類型(如FFPE樣品)，需要壹些特殊的操作或處理。“我們開發了獨特的結合/洗滌緩沖液，可以有效地去除抑制下遊反應的物質，而優化的系統使研究人員能夠捕獲少量的核酸，並以小體積(小於30μl)洗脫它們，我們還開發了適用於各種試劑和通量的自動化解決方案，”文森特說。這些試劑盒提供了完整的解決方案，能夠以非常小的體積洗脫核酸，同時避免抑制劑殘留在洗脫液中。通過這些試劑盒純化後，核酸可用於下遊分析，如PCR、Sanger測序、下壹代測序和芯片。QIAGEN經典的矽膠膜核酸純化試劑盒是依靠DNA和矽膠膜在純化柱上的結合。洗去抑制劑，完整的DNA隨後從柱上洗脫下來，產量高，純度高，帶來了質量更高的新壹代測序文庫。QIAGEN樣品制備全球產品經理Marco Lidori認為，在處理極小樣品或FFPE等困難樣品時，高產量變得尤為重要。FFPE樣本產生的DNA中可能出現隨機的胞嘧啶脫氨作用，這可能導致人工單核苷酸多態性(SNP)。然而，QIAGEN的GeneReadDNAFFPEKit可以去除脫氨基的胞嘧啶，避免在NGS實驗中產生錯誤的結果。該產品尚未正式上市。如果您有興趣試用，請填寫信息。“我們的大多數試劑盒已經在NGS應用中得到驗證，從循環腫瘤DNA的全基因組測序到微生物組，”Polidori說。這些試劑盒使用戶能夠從各種樣品中獲得高質量的DNA，避免FFPE樣品的C-T錯覺，並在短時間內獲得高分子量的DNA。MagAttractHMWDNAkit可以通過簡單的磁珠操作純化100-200kbDNA。整個純化過程溫和去除汙染物和抑制劑，收率和純度極高。由離液鹽公司適馬-奧爾德裏奇提供的GenElute？mammaliangenomicpurification kit是壹種基於離液鹽試劑的產品。在含有離液鹽的溶液中，樣品被裂解以確保大分子的完全變性。加入乙醇使DNA與矽膠膜結合。洗去汙染物，在Tris緩沖液中洗脫DNA。通過專門選擇用於分離基因組DNA的矽膠膜，該試劑盒使用戶能夠從各種樣品中純化高質量的DNA，包括培養的細胞、組織(包括大鼠尾巴)、新鮮全血或白細胞。據介紹，這種試劑盒結合了矽膠膜結合和微量離心的優點，避免了昂貴的樹脂、乙醇沈澱和苯酚、氯仿等有害有機物。更重要的是，純化的DNA可用於限制性酶切、PCR、Southernblot、測序等。(作者:JamesNetterwald/生物學編譯)
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