答： SMARTTM cDNA 合成技術利用總RNA 或者Poly A+ RNA 作為模板，以壹種改造的oligo(dT)寡苷酸作為引物，在MMLV 反轉錄酶催化作用下合成第壹鏈。當反轉錄酶到達mRNA 的5'末端時，反轉錄酶的末端轉移酶活性會在第壹鏈 cDNA 的3'端加上3-5 個脫氧胞苷酸。SMART寡苷酸的3'端含有壹段延長的鳥苷酸殘基，與富集的胞苷酸退火形成延伸的模板。然後反轉錄酶轉換模板，以SMART 寡苷酸作為模板繼續延伸。這樣合成得到的單鏈cDNA 在3'端有壹段與SMART 寡苷酸互補的序列，在5'端有壹段與oligo(dT)引物互補的序列。這些序列作為下壹步進行長距離PCR 的引物合成位點。結果可以得到富集全長序列的雙鏈cDNA。
問：SMART試劑盒系列產品之間有什麽差別？
答： SMART cDNA Library Construction Kit 是用來從少量RNA 樣本中構建高質量的cDNA 文庫。試劑盒中包括有SMART cDNA 合成和文庫構建到? TriplEx2 或者Creator 供體載體pDNR-LIB所需的試劑。因為該試劑盒是特別針對文庫構建來設計的，所以它與Clontech? PCR-Select?cDNA 差減雜交試劑盒不能配合使用。
SMART PCR cDNA Synthesis Kit 可以用來與Clontech? PCR-Select? cDNA 差減技術壹起使用。總RNA 不能直接用來做差減實驗，但可以通過SMART PCR cDNA Synthesis Kit 來擴增出高質量的cDNA，從而可以用作雜交實驗。同樣，少量的Poly A+ RNA 也可以用SMART PCR cDNA Synthesis Kit 來擴增。SMART cDNA 也可以在妳僅有有限的RNA 樣本時從來做虛擬的Northern 雜交，用來代替標準的Northern 雜交。SMART PCR cDNA Synthesis Kit 含有SMARTⅡ寡苷酸和cDNA 合成引物，兩段序列都具有用來做Clontech? PCR-Select 差減所需的RsaⅠ位點。該試劑盒也可以從來構建SMART cDNA 文庫於其它自選載體中。
SMART RACE cDNA Amplification Kit 結合了SMART cDNA 合成技術和RACE 的方法。該試劑盒優點在於可以構建全長cDNA,無需接頭連接，靈敏度強，方法簡單。
問：SMART技術可以用來做cDNA 末端快速擴增嗎（RACE）?
答：可以。隨著新的SMART RACE cDNA Amplification Kit 的進壹步完善，SMART 技術的所有優點都可以用在RACE 方案中。
問：為什麽在SMART cDNA Synthesis 過程中對PCR 循環數有壹定限制？
答：SMART cDNA 技術的獨特點之壹就是長距離PCR 擴增步驟。為了保持SMART cDNA 的基因代表性，進行盡量少的循環數量是很必要的。如果循環數過高，擴增超過指數增長階段時，就會出現ssDNA 的積累，不適合進行cDNA 後期操作如克隆或者差減。此外，循環數越高，熱穩定聚合酶出錯的幾率就越高，PCR 的保真度相應就會降低。因此，為了獲得高質量的cDNA，穩定循環數在認可的參數之內是非常重要的。
問：SMARTTM文庫的特點有哪些？
答：SMART cDNA 文庫富集了全長的cDNA。插入片段的平均大小是1.5-2 Kb。我們曾經從SMART 文庫中克隆到的最大插入片段是大於6kb 的β-肌球蛋白cDNA。即使起初材料用的是總RNA，也幾乎不會篩選到核糖體RNA。實驗結果表明，來自於SMART cDNA 文庫的50 個克隆分析表明沒有核糖體RNA 克隆。以50 ng 總RNA 或者25 ng poly A+ RNA 構建的SMART cDNA 文庫的基因保真度，與用標準的Gubler and Hoffman 方法以5 ug poly A+ RNA 構建的文庫相似。
問：為什麽SMARTTM PCR 擴增得到的cDNA 沒有rRNA 序列？
答：雖然在SMART 第壹鏈cDNA 合成過程中rRNA 可以被反轉錄，但這些序列在接下來的PCR過程中不會被擴增。這是因為多數情況下，rRNA 序列是通過自身引導來反轉錄的，所以最終得到的cDNA 片段不具備5'和3'SMART 特異性序列，不能夠進行指數PCR 擴增。
問：可以用作SMART PCR cDNA 擴增模板所需的RNA 的最少量是多少？
答：雖然我們用SMART 技術可以從10ng 的總RNA 中構建文庫，但我們推薦原始材料最少是50ng 總RNA 或者25ng poly A + RNA。從而保證SMART cDNA 群質量更高，基因代表性更強。
問：我可以改變SMARTTM寡苷酸序列嗎？
答：任何壹種寡苷酸序列的改變都會影響cDNA 合成和擴增的效率。SMARTⅡ和SMART Ⅳ寡
苷酸的序列和設計都是受專利保護的。
購買儀器、試劑和耗材——就在易生物！