2註釋Taq DNA聚合酶從嗜熱真菌yT 1中分離。YT是壹種嗜熱真菌,能在70 ~ 75℃生長。它是1969年從美國黃石國家森林公園的火山溫泉中分離出來的。該酶基因全長2496個堿基,編碼832個氨基酸,酶蛋白分子為94KDa。其比活為200000單位/毫克。在75 ~ 80℃時,每個酶分子每秒可延伸約150個核苷酸,70℃時延伸大於每秒60個核苷酸。在55℃時,是24個核苷酸/秒。溫度過高(90℃以上)或過低(22℃)都會影響Taq DNA聚合酶的活性。雖然90℃以上幾乎沒有DNA合成,但該酶確實具有良好的熱穩定性,在PCR循環的高溫條件下仍能保持較高的活性。在92.5℃、95℃和97.5℃下,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分別在65438±0.30min、40min和5 ~ 6 min後仍能保持50%的活性。實驗表明,PCR反應的變性溫度為95℃ ~ 20秒,50次循環後,Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的熱穩定性是其應用於PCR反應的先決條件。也是PCR快速發展和廣泛應用的原因。Taq DNA聚合酶也有逆轉錄活性,類似於逆轉錄酶。這種活性的溫度壹般為65 ~ 68℃,在Mn2存在下,其逆轉錄活性較高。
TaqDNA聚合酶是壹種依賴於Mg2的酶,其催化活性對Mg2的濃度非常敏感。當dNTP的濃度為0.7 ~ 0.8 mmol/L時,用不同濃度的Mg2進行PCR反應10min,結果表明,當Mgcl2的濃度為2.0 mmol/L時,該酶的催化活性最高,該濃度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性,當Mg2濃度過高時,會抑制Taq DNA聚合酶的活性,當Mgcl2的濃度為10mmol/L時,由於Mg2可以與dNTP結合,會影響PCR反應液中遊離Mg2的濃度,所以在不同的反應體系中,Mgcl2的濃度要適當調整。優化濃度。壹般來說,Mg2的濃度應至少比dNTP的總濃度高0.5 ~ 1.0 mmol/L。適當濃度的KCL可使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50~60%,最佳濃度為50mmol/L,當KCL濃度高於75mmol/L時,Taq DNA聚合酶的活性受到明顯抑制。