接下來我們看看都要哪些要求：
1.不建議跑平行膠，因為平行膠和剝離膜孵育體系，操作條件的不壹致，影響定量的準確性，因此最好內參和目的蛋白要在同壹張印跡膜上
2.選擇寬態範圍的方法，確認信號強度與所上樣量之間的線性關系，例如用膠片做化學發光方法的動態範圍就很窄，不建議使用：
數字成像相比膠片動態範圍更寬、定量更準確
3.強烈推薦使用總蛋白進行歸壹化，因為看家蛋白容易受處理條件影響而發生變化，影響定量的結果，使用總蛋白定量更真實地反映目標蛋白表達量的變化
4.提交原始數據，例如：JBC，PLOS和CELL等雜誌都要求要提供原始數據
聊完了期刊雜誌的壹些要求，那Azure Sapphire雙模式多光譜激光成像系統是如何幫助您獲得滿足期刊雜誌Western Blotting要求的數據：
★ Sapphire是多熒光檢測系統，可多達4個激光光源，同時進行4通道熒光檢測，獲得更快的工作流程和更可靠的定量數據
熒光Western Blotting使用熒光基團標記的二抗進行檢測，膜上的靶標蛋白濃度與可見熒光信號強度呈線性關系，實現真實可靠的定量分析。熒光染料發射光譜不同，因此在壹張印跡膜上可實現多個蛋白檢測。這樣目標蛋白和內參蛋白在同壹張膜上，就可以避免數據造假的情況發生，更容易被期刊雜誌接收。
圖1：通過使用四種光譜不同熒光基團標記的二抗，可以同時檢測多達四種不同的蛋白。HeLa細胞裂解物上樣，
anti-tubulin (550nm, 綠色), anti -actin (700nm紅色), anti-GAPDH (800nm, 灰色),
和anti-transferrin (490nm, 藍色)這四種蛋白同時成像，沒有交叉。
★ Sapphire配合AzureRed總蛋白熒光染色劑可以做總蛋白歸壹化和定量三個靶標蛋白，生成可以信賴的定量Western Blotting數據
使用總蛋白歸壹化，以校正泳道和樣品之間的差異。傳統的方法無法準確知道條帶灰度值和強度的變化是由於樣品的生物學變化引起的，還是由於上樣或樣品的不壹致性或樣品制備的差異引起的。總蛋白歸壹化優勢如下：
? 總蛋白比看家基因等內參的線性檢測範圍更寬。
? 在整個實驗和系統中更加穩定。
? 能有效排除實驗條件和體系對結果的影響。
? 更真實地反映目標蛋白表達量的變化。
圖2.總蛋白歸壹化和定量三個靶標蛋白. Tubulin 紅色通道, Actin 藍色通道,
GAPDH綠色通道, AzureRed/total protein 用灰色表示
圖3.使用總蛋白對Tubulin信號進行歸壹化，糾正上樣誤差
★ Sapphire配有獨特的三種檢測器設計，最大限度地提高儀器的檢測動態範圍，保證結果的準確性
PMT檢測器用於藍光檢測和磷屏成像。
APD檢測器用於NIR，紅色和綠色熒光的檢測。
CCD檢測器用於高靈敏化學發光的檢測。
（*專利技術）
★ Sapphire提供原始數據16bit的tiff圖給到期刊，這裏的tiff原始數據是指未經裁剪，像素修改，對比度調整等任何操作的圖，保證結果的真實性和可靠性
Sapphire除了進行熒光印跡膜，化學發光印跡膜檢測外，還可以進行In cell western孔板成像、In-Gel膠，2D和2D DIGE、切片掃描、組織成像和動植物成像、同位素標記樣品磷屏成像等。