抗原刺激的淋巴細胞局部產生細胞因子，細胞因子被ELISPOT板底部PVDF膜上的特異性單克隆抗體(預包被)捕獲。去除細胞後，捕獲的細胞因子與生物素標記的單克隆抗體結合，然後與堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶標記的抗生物素蛋白結合。加入底物後PVDF膜上出現紫色或紅棕色斑點，說明細胞產生了細胞因子。斑點由ELISPOT讀數器自動計數和分析。
德國AID公司多年來壹直專註於酶聯免疫斑點分析儀的研發。自20世紀90年代以來，AID公司為世界各地的科研、臨床和制藥實驗室提供了大量的酶聯免疫斑點閱讀器。其在各個領域的應用隨處可見，已經成為全世界科研人員認可的品牌。
利用AID酶聯免疫斑點分析儀對ELISPOT板上各孔的斑點圖像進行自動采集、統計和分析，不僅可以自動獲得斑點數量並給出細胞因子的分泌活性值，還可以根據預先設定的判讀規則直接獲得陰性和陽性結果，並將結果輸出到JPG、EXCEL、TXT、PPT等。它還可以連接到實驗室的LMS系統進行數據管理和輸出，從而成為壹個可靠的ELISPOT分析工具。
此外，傳統的ELISPOT也有局限性，缺乏對T細胞產生的多種細胞因子的同時檢測。為了克服這個問題，基於熒光標記，開發了熒光免疫斑點分析(熒光斑點)。這種新的熒光免疫印跡分析技術可用於在單細胞水平檢測表達多種細胞因子的淋巴細胞，如共表達IFN-γ(綠色熒光標記)和IL-2(紅色熒光標記)的T細胞。
德國AIDSPOT Reader首次實現了應用壹臺酶聯免疫斑點分析儀同時分析傳統ELISPOT和熒光免疫斑點熒光斑點:AIDSPOT Reader在ELISPOT板的每個孔中采集壹幅綠色熒光斑點(FITC標記的IFN-γ)圖像和壹幅紅色熒光斑點(Cy3標記的IL-2)圖像，並通過FluoroAID專利的熒光圖像疊加技術融合兩幅圖像，保證共染色斑點計數的準確性。
AID酶聯免疫斑點分析儀采用世界著名的ELISPOT試劑生產商瑞典Mabtech公司的產品，可用於人、猴、鼠、鼠細胞等物種，以及獸醫領域，檢測牛、羊、馬、豬等樣本的T/B細胞免疫應答。除了IFN-γ和白細胞介素系列，還有TNF-α、穿孔素、顆粒酶B和MIP-1β。
①人:apoE、GM-CSF、顆粒酶B、IFN-α (Subt.2，8，10，14，17)、IFN-α(pan特異性)、IFN-γ、IL-1β。IL-12/-23(p40)、IL-12(p70)、13、17A、21、23、31、MIP-1β、穿孔素、TNF-α；
②猴:IFN-γ、IL-2、IL-17；
③小鼠:GM-CSF、IFN-α、IL-4、5、6、IL-12/-23(p40)、IL-13、IL-21、MIP-1β、穿孔素、TNF。
④其他:萊姆病斑、EBV-Spot、CMV-Spot、Trans Spot試劑盒；
⑤有關更多T細胞/B細胞ELISPOT和熒光斑點試劑盒，請咨詢。
靈敏度高:20-30萬中1陽性細胞檢出率；
直觀可靠:單細胞水平檢測，壹個陽性細胞有壹個斑點，斑點的數量代表細胞分泌細胞因子的數量，斑點的大小代表細胞分泌細胞因子的水平；
高通:壹個ELISPOT板可以用於96次測試，研究人員每天可以檢測數百個樣本。只需少量細胞，如45毫升血液，就足以測試600種不同抗原/肽的反應。
活細胞的功能檢測:被檢測的細胞因子並不存在，而是在檢測過程中通過外加刺激而分泌的；
臨床實驗適用:經過凍存復蘇的細胞不喪失免疫功能，這對臨床試驗非常重要。處理前後的樣本可以平行檢測，結果可以重復；如果試驗涉及多個臨床機構，可以將血樣冷凍後運送到核心實驗室進行檢測。
ELISPOT不僅用作科學研究工具，還用於臨床診斷。最近，第壹個診斷平臺(T-Spot。TB)由SFDA根據ELISPOT方法批準上市。這種檢測結核感染的試驗方法是通過測量結核特異性抗原刺激的IFN-γ分泌來檢測特異性T細胞免疫反應。它可以代替傳統的皮試，並大大提高敏感性和特異性，且不受卡介苗接種的影響。ELISPOT還可用於抗感染免疫研究和其他傳染病的診斷，如乙型肝炎、丙型肝炎、EB病毒、巨細胞病毒和萊姆病。
ELISPOT法是國際公認的檢測和評估疫苗細胞免疫水平的標準工具。在國際上，IFN-γ ELISPOT法在HIV疫苗研究中被廣泛用於監測免疫反應，ELISPOT法在國際艾滋病疫苗行動計劃中被用於在大量試驗中評估T細胞的功能以監測新的HIV疫苗候選物。ELISPOT方法通過測量疫苗誘導強T細胞反應的能力來定義疫苗的效果。ELISPOT法可用於疫苗開發和設計中篩選和確定抗原的特異性T細胞表位。這些信息也可用於評估適當的免疫策略和免疫途徑。
中國藥品生物制品檢定所在《預防性DNA疫苗臨床前研究技術指南》和《預防以病毒為載體的活疫苗制劑技術指標原則》中指出，ELISPOT法是檢測和評價疫苗細胞免疫效價的有效方法。ELISPOT技術作為壹種更敏感的檢測T/B細胞特異性分泌的方法，對檢測少量抗原特異性記憶T細胞尤為重要，已廣泛應用於預防性疫苗和治療性疫苗的研制和評價，如艾滋病疫苗、乙肝疫苗、流感疫苗和各種腫瘤疫苗。
根據檢測到的不同細胞因子，ELISPOT可用於區分不同的活化T細胞亞群。如Th1細胞主要分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α，其他細胞因子如IL-4、IL-5、IL-13壹般由Th2細胞分泌。變態反應研究中的壹個熱點是通過ELISPOT測定Th2細胞因子，因為Th2反應是變態反應的主要反應，但它通常以低頻率發生，並且需要高靈敏度的方法才能成功檢測。
在針對特定過敏反應的免疫療法中監測T細胞免疫反應；在細胞介導的體外檢測和診斷接觸性變態反應的應用中，ELISPOT方法越來越受到變態反應工作者的關註。因為對於諸如IL-4(Th2型反應的主要細胞因子)之類的因子，其總是難以通過其他方法(例如流式細胞術和ELISA)來檢測，所以通過使用高靈敏度的ELISPOT方法來研究過敏原特異性免疫反應尤為重要。
ELISPOT技術還廣泛應用於自身免疫性疾病的診斷和病因學研究，如I型糖尿病、多發性硬化、重癥肌無力和系統性紅斑狼瘡等疾病的病因學分析，疾病預測、早期診斷、指導治療和預後分析。
雖然ELISPOT主要用於T和B細胞分析，但它也適用於任何想要在單細胞水平上研究蛋白質分泌的實驗。該方法特別適用於那些效應細胞數量至關重要或具有生物學意義的實驗，如LPS刺激PBMC後分泌IL-6和IL-1β的單核細胞的定量分析；此外，它還特別適合於研究數量特別少的分泌細胞，如漿細胞樣樹突狀細胞，這種細胞在血液中特別少，但它們活化後分泌的IFN-α可以很容易地被ELISPOT檢測到。
例如
藥物篩選:化合物的篩選和藥物的免疫反應；
腫瘤免疫研究:已用於分析評價腫瘤患者體內誘導腫瘤特異性T細胞的疫苗試驗。治療前後特異性細胞免疫應答水平的檢測可有效評價治療效果，為治療和用藥提供重要參考信息。
移植免疫研究:移植排斥反應的預測。
自上市以來，全球已有超過65，438+0，500個實驗室在使用AID的酶聯免疫斑點分析儀。AID ELISPOT閱讀器的硬件和軟件完全符合歐盟ce認證、FDA 21 CFR Part 11規範和GMP/GLP標準。
散斑圖像采集和計數
全自動讀數板，自動采集每個孔的圖像；自動計算斑點數量和斑點相關信息，如大小、面積、光密度等。內置不同因子參數設置，直接調用；CountAID功能有助於優化讀取參數，並具有智能參數記憶功能。
結果分析
直接判斷陰陽測試結果；診斷模塊AIDiagnostic，適用於為臨床診斷解釋ELISPOT實驗的結果，並分別輸出每個患者的散斑圖像和結果報告；統計分析每個孔中斑點的分布，比較免疫反應，細胞因子分泌的定量比較等。
數據輸出和質量控制
可以輸出單孔圖像、任意孔圖像和整板圖像；多種保存格式，Excel，Txt，PPT等。輸出數據可以定制為包括點號、SFU、光密度強度、活動性、點分布圖等。包括質量控制模塊，自動記錄操作歷史，符合GLP規範。
熒光雙色ELISPOT分析——fluoro spot采用專利的熒光圖像疊加技術，確保對多色因子共分泌斑點的準確識別，避免酶標雙色檢測中不同細胞因子分泌不均勻導致的誤判。4-8位濾光輪，全自動切換，至少標配FITC和Cy3熒光濾光片，其他波長可以添加。
全自動翻譯
ISpot對平板各孔中各種顏色的熒光點分別成像，如檢測FITC標記的IFN-γ和Cy3標記的IL-2的分泌，軟件自行疊加不同的熒光圖像，準確識別共分泌(IFN-γ&；IL-2)細胞。整個過程全自動，無需人工幹預。
性能穩定，兼容性和擴展性好
高能激發保證微弱熒光信號檢測，窄帶濾光片保證特定信號檢測，多色擴展只需配濾光片。
技術進步
世界上第壹臺上市的酶聯斑點分析儀，1996發明了“ELISPOT法檢測血細胞活性”專利；唯壹專利PCT/EP2008/009112 ‐氟酸是基於熒光濾光片的熒光多色ELISPOT檢測系統。
學術出版權威
從2007年熒光產品上市到現在，80%關於熒光ELISPOT應用的SCI文獻都是由AID發表的，是公認的熒光檢測的較好選擇。
國際認可度高
它是與牛津大學牛津免疫學實驗室密切合作開發的，是結核病T-Spot診斷的專用工具。國際艾滋病疫苗行動組織(IAVI)指定品牌；世界知名的ELISPOT試劑盒開發實驗室(如瑞典Mabtech)專用品牌。
請聯系我們13521452266申請AID酶聯免疫斑點分析儀的試用。
——德國援華壹級代理，北京澤平