本文通過同源重組,構建了表達AVP,VIP,PROK2神經多肽的iCre(improved Cre,優化的Cre重組酶)BAC載體。通過受精卵原核註射,得到了在SCN特異性神經元表達iCre重組酶的轉基因小鼠,它們分別是AVP-iCre,VIP- iCre,PROK2- iCre。然後對轉基因小鼠進行基因型以及拷貝數鑒定,並將其陽性小鼠與Rosa26-mT/mG報告小鼠交配,對得到的雙陽性小鼠進行SCN切片。
進壹步通過觀察綠色熒光蛋白的分布與SCN特異神經元的分布,判斷這些iCre轉基因小鼠表達的CRE的組織特異性和活性。同時在沒有外在光暗周期的環境中測量這些轉基因小鼠的生物節律情況,排除它們的生物節律被損壞了,結果發現iCre轉基因小鼠與野生型小鼠的生物節律沒有區別,AVP-iCre,VIP-iCre和PROK2-iCre小鼠可以用來研究生物節律。因此本文成功構建了三個iCre轉基因工具小鼠。