目的采用大腸桿菌β-半乳糖酶基因LacZ作為報告基因,建立Tyro3、Axl受體酪氨酸激酶含有loxp位點的轉基因小鼠.與不同組織特異性Cre小鼠雜交,獲得時空性表達Tyro3、Axl的轉基因小鼠,為研究其在各個組織中的功能奠定基礎.方法構建含有loxp位點的Tyro3、Axl受體酪氨酸激酶質粒,測序正確後,通過顯微註射法將插入CAG啟動子下遊的Geo-STOP-msAxl及Geo-STOP-msTyro3基因的轉基因載體註射入BDF1供體鼠受精卵,移植受精卵至ICR受體鼠,待產仔後,通過雙引物PCR鑒定F0以及Fn代小鼠的基因型,RT-PCR,X-gal染色觀察小鼠組織中LacZ基因,運用WB(Western Blot)檢測轉基因小鼠和野生型小鼠體內目的蛋白表達的差異.結果獲得了含有目的基因的轉基因陽性小鼠;通過RT-PCR對陽性小鼠證明LacZ基因的存在;對存在LacZ基因的小鼠進行X-gal染色,在Geo-STOP-msTyro3的腦、睪丸、胸腺中觀察到藍色沈澱,在Geo-STOP-msAxl的腦、心、腎中觀察到藍色沈澱,間接說明目的基因能表達的組織和器官;對雙陽性的Geo-STOP-msTyro3、Geo-STOP-msAxl轉基因小鼠和野生型小鼠,WB檢驗證實Tyro3、Axl基因的表達沒有差異,說明在加入stop序列之後,Tyro3基因確實存在,而且表達受到抑制.結論成功建立Geo-STOP-msAxl及Geo-STOP-msTyro3酪氨酸受體轉基因小鼠.
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