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壹步法PCR的特點及解釋

產品特點?

◎逆轉錄和定量PCR可在壹個反應管中壹步完成,操作簡單快捷;

◎采用化學修飾的熱啟動聚合酶,反應特異性高,有效避免非特異性擴增;

◎反應緩沖液經過充分優化,靈敏度高,最低可檢測1pg總RNA中的目的片段,特別適合低拷貝RNA的檢測。

◎加入百代生物RT-PCR的專利活素,可以明顯提高RT-PCR的產量。CT值壹般早3-5個周期,S形曲線較為典型。

描述:1,BIOGHSC?超級?探針混合物含有dNTP混合物和Mg2+,BIOGHSC?超級?酶混合物包含BIOG超級逆轉錄酶、BIOG熱啟動聚合酶和熒光素。2.壹般來說,反應體系中引物的最終濃度為0.3μM,可以得到較好的擴增效果。當反應結果不理想時,可在0.1-1.0μ m範圍內調整引物濃度..?3.TaqMan探針的最終濃度可以在0.1微米和0.45微米之間調節..4.qPCR靈敏度高,模板量的準確性對結果影響很大。建議適度稀釋後加入模板,或用50?l反應系統。5.模板體積不應超過反應體積的10%。6.請選擇100bp-500bp範圍內的擴增產物長度,最好是100-200bp。?7、制備反應體系時,避免劇烈攪拌,以防產生氣泡。8.反應條件:42℃逆轉錄反應15分鐘,95℃加熱5分鐘激活熱啟動DNA聚合酶,然後95℃加熱?15秒,60℃?35秒,35-40個周期。反應條件可以根據目標片段的大小和引物的Tm值適當調整。8.如果模板具有復雜的二級結構,反應溫度可以提高到55℃,有助於提高產率。

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