懸浮細胞轉染性能優異:細胞轉染陽性率壹般在75%以上，基因敲除效率在80%以上；
細胞毒性極低:轉染細胞死亡率小於10%，大大降低了細胞毒性對實驗結果的影響；
◎轉染細胞範圍廣，大多數懸浮細胞都能獲得理想的轉染結果。
產品介紹
RFectSP懸浮細胞小核酸轉染試劑是我們研發團隊在RFectPM原代細胞小核酸轉染試劑的基礎上研制成功的壹種專門用於懸浮細胞小核酸轉染的試劑。RFectSP可用於轉染200bp以內的小分子RNA和DNA，如siRNA、反義RNA和microRNA，可轉染大多數懸浮細胞。目前，懸浮細胞中的核酸轉染是國內外研究的熱點問題，市場上還缺乏真正有效的懸浮細胞小核酸商業化轉染試劑。RFectSP能高效轉染大多數懸浮細胞，獲得理想的基因敲除效果。對於大多數懸浮細胞，RFectSP的轉染陽性率在75%以上，而轉染細胞的死亡率小於10%。RFectSP的使用也非常簡單。首先在室溫下將sRNA和RFECTSP混合，然後將SiRNA和RFectSP的混合物直接加入到含有培養基的細胞中。血清對轉染效果無影響，無需刻意添加或更換培養基。我們已經申請了RFectSP懸浮細胞小核酸轉染試劑的材料合成和試劑制備的國際專利，並通過PCT覆蓋了世界多個國家和地區。
操作步驟:本說明書適用於24孔培養板的轉染實驗。對於其他規格的培養板的用量，請參考下表，該表顯示了每個孔的用量和體積。
A.細胞接種:轉染前壹天接種細胞，每孔500 μl培養基，使轉染時細胞密度為30-50%，盡量不使用抗生素。
B.SiRNA-rfectsp混合物的制備:
1.6pmol siRNA用50μl無血清培養基稀釋。
2.2μl RFectSP用50μl無血清培養基稀釋。輕輕5分鐘，並在室溫下孵育5分鐘。註意:壹定要在25分鐘內完成第三步，不要拖延太久。
3.孵育5分鐘後，用RFectMN稀釋劑(總體積100μl)稀釋siRNA 5min。輕輕混合並在室溫下孵育20分鐘。
C.將混合物加入培養的細胞中(完全培養基培養):
1.將100μl的混合物加入含有0.5ml培養細胞的培養孔中。輕輕搖動培養板5分鐘，並充分搖動5分鐘。
2.37℃培養48-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養4-6小時後可以更換培養基，但不是必須的。孵育時間的長短取決於細胞類型，
幹擾基因本身及分析方法。可以為實驗設置不同的孵育時間，以確定最佳的孵育時間。
轉染實驗的優化:為了提高轉染效率，最好優化轉染條件，尤其是第壹次。例如:24孔培養板，調整siRNA和RFectSP試劑的用量。siRNA的劑量調整在6-60 pmol之間(終濃度10-100 nm)，RFectSP試劑的劑量調整在1.0-3.0 μ l之間
轉染實驗要點
l轉染時盡量不要使用抗生素，否則會導致細胞死亡增加；
l第壹次實驗中siRNA的劑量設定為10nM、30nM、50nM、100 nM的終濃度，後續實驗根據實驗結果進行修正。