近期，耶魯大學研究團隊將其關於治療腫瘤的壹項新的免疫療法結果發布於《Nature Immunology》期刊上。這篇名為“Multiplexed activation of endogenous genes by CRISPRa elicits potent antitumor immunity”的文章中所展現的結果表明，基於CRISPR激活（CRISPRa）平臺的多重激活內源基因免疫療法（MAEGI，Multiplex Activation of Endogenous Genes as Immunotherapy）可靶向特定類型的癌細胞並激活相關基因表達，通過精確定位、標記並放大信號，使免疫系統攻擊標記的癌細胞，可有效殺傷或消除小鼠體內多種類型的腫瘤。這種治療方式通過改變腫瘤微環境，並以增強T細胞浸潤和抗腫瘤免疫為特征。多路內源性基因激活是壹種多用途的、高度可伸縮的策略，以引發針對腫瘤的有效免疫反應，有別於所有的腫瘤療法。這項研究有望幫助人類的免疫系統識別、攻擊並殺死癌細胞。
首先，研究人員用腺相關病毒來遞送CRISPRa文庫到腫瘤內部並精準靶向腫瘤的突變基因。研究表明通過CRISPRa慢病毒載體轉染三陰性乳腺癌（TNBC）細胞E0771?，使得細胞同時表達dCas9-VP64和MS2-p65-HSF1，並進而利用磷酸甘油酸脂激酶PGK基因的啟動子激活OVA蛋白的表達從而得到E0071-OVA穩轉細胞系，並與分離出來的經OVA體內活化的CD8+?T細胞進行***培養，來評估此腫瘤免疫療法的有效性。TAAs(腫瘤相關抗原)低表達的腫瘤細胞經CRISPRa激活後可在細胞膜表面高表達TAAs，並被免疫系統的CD8+?T細胞識別和殺傷。
在上述的模式研究模型的基礎上，研究人員將MAEGI療法拓展到了小鼠身上，並借助AAV-CRISPR體系遞送sgRNA文庫到C57BL/6J小鼠的TNBC腫瘤內部，結果發現相比PBS處理組和空載質粒組，導入AAV-g-MAEGI小鼠的腫瘤生長受到了顯著的抑制，於此同時ELISA實驗也證明AAV-g-MAEGI組小鼠有著更多IFNγ的產生和更多數目的活性CD8+?T細胞。以上結果也表明，通過MAEGI療法，小鼠體內的抗腫瘤免疫活性得到了顯著增強。
最後，研究者借助單細胞測序技術，在細胞水平進壹步驗證了活化的免疫細胞群的組成，發現C57BL/6J乳腺癌小鼠在經過不同劑量的AAV-MAEGI治療後，高劑量組的小鼠體內有著更高比例的CD4+和CD8+活性細胞，顯示了MAEGI療法可通過增強免疫反應來達到消除腫瘤的目的。
綜上所述，研究者證明了通過CRISPRa直接激活內源性突變基因可以放大腫瘤細胞的“非自身”信號，從而誘導強大的抗腫瘤適應性免疫。各種形式的MAEGI，包括AAV-g-MAEGI和AAV-p-MAEGI，以及任何內源性基因激活治療的未來衍生物，提供了壹種正交模態的腫瘤免疫治療模式，即作為單壹藥物或與其他治療模式協同使用。在進入I期臨床試驗之前，MAEGI的未來臨床轉化還需要排除過表達的潛在有害基因，優化成分和設計，在動物模型中評估毒性，以及開發成藥的探究性研究。
抗癌英雄免疫細胞
美國生物學家喬治戴利曾說：如果20世紀是藥物治療時代，那麽21世紀就是細胞治療的時代。在精準定位和識別癌細胞相關抗原的基礎上，人體的免疫系統會開始攻擊標記的癌細胞，其中殺傷性的免疫細胞作為尖兵構成了抗腫瘤免疫系統的核心力量，因此免疫細胞是抗癌戰役中真正的英雄。正常人體每天都將產生上百個癌變細胞，但它們在形成腫瘤病竈前就基本被免疫細胞消滅了。所以優質的免疫系統是人體自身最好的醫生。過繼性免疫治療（Adoptive Cell Transfer Therapy, ACT），是指從腫瘤患者體內分離免疫活性細胞，在體外進行擴增和功能鑒定，然後向患者回輸，從而達到直接殺傷腫瘤或激發機體的免疫應答殺傷腫瘤細胞的目的。過繼性免疫細胞治療主要包括TIL、LAK、CIK、DC、NK、TCR-T、CAR-T等幾大類。其中CIK（cytokine-induced killer），又稱為多種細胞因子誘導的殺傷細胞，由於該種細胞同時表達CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子，故又被稱為NK細胞樣T淋巴細胞，兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優點。因此， 應用 CIK細胞被認 為是新壹代抗腫瘤過繼細胞免疫治療的首選方案 。
CIK細胞中的效應細胞CD3+CD56+細胞在正常人外周血中極其罕見，僅1%～5%，在體外經多因子培養28～30天，CD3+CD56+細胞迅速增多，較培養前升幅可達1000倍以上，進而再回輸到體內，發揮響應的功能活性，CIK的活性主要有以下幾方面：
(1) CIK細胞增殖速度快，抗腫瘤活性細胞可大量增殖，且細胞活性也大大增強。(2) CIK細胞具有識別腫瘤的機制，對正常的細胞無毒性作用。(3) 殺瘤譜廣，可用於白血病、淋巴瘤、肺癌、胃癌、腸癌等多種腫瘤的治療，對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感。(4) 是典型的個性化生物治療模式。將這類細胞回輸後，還能使機體免疫能力提高，產生特異的抗病毒作用，從而對腫瘤治療施以雙重的作用。(5) 由於CIK細胞是活化的自體細胞，用起來非常安全。
然而免疫細胞也有質量之分，隨著年齡的增長，人體的免疫細胞也會發生相應的變化，其細胞活力及數量會隨著年齡的增加而減弱。例如，人在40-50歲時，免疫細胞的功能（活力和數量）就僅為身體巔峰時期的1/2。這在壹定概率上增加了人體的患病（如腫瘤等疾病）風險。為避免這壹問題，尖端生物科技的細胞存儲技術應運而生，這種技術可以將細胞存儲壹定的時期，保證其功能和活性不受因時間推移產生明顯的影響。如果能將人體年輕時的優質免疫細胞進行存儲，在需要時提取使用，無疑對於抗感染、抗腫瘤及提高自身免疫力等方面都有很大的幫助。
免疫細胞存儲—您的“健康種子”
免疫細胞存儲是指利用先進的生物技術，從人體血液中分離並富集壹定數量的免疫細胞，結合細胞的生物物理因素，將免疫細胞保存在-196℃的低溫條件下，從而維持免疫細胞的多樣性與高活性潛能，使細胞處於休眠狀態，待需要時再進行復蘇和擴增，用於精準細胞治療和美容抗衰老等領域。具體來說就是利用特定的細胞凍存基質，這些基質通常含有冷凍保護劑DMSO或者甘油以及血清組分，並通過緩慢的梯度降溫歷經4℃、-20℃、-80℃並最終達到-196℃，也可通過商業化的細胞凍存盒將細胞直接放入-80℃並進而放入液氮中。細胞復蘇則強調的是快速，即將液氮中的細胞直接放入37℃進行水浴，快速升溫減少細胞復蘇過程中冰晶等融化帶來的傷害，通過慢凍存快復蘇可以最大程度的減少細胞的受損程度，維持細胞的高活性。
細胞存儲的目的是為了將來使用，無論是防病、治病還是抗衰老，都對存儲細胞的機構的科研能力和存儲能力有很高的要求。在國內相關的企業中，吉濤健康與中國科學院在近日簽署了免疫細胞科研戰略合作協議。雄厚的科研實力和專業的市場化管理，讓雙方的合作在細胞存儲、制備及科研轉化等方面形成了四位壹體的細胞全流程服務鏈條。中國科學院種子庫凍存細胞的服務更為吉濤生物的用戶打造了多點備災的保險櫃，可為用戶終身存儲細胞。