乙醇回流提取黃酮類化合物的原理

在從植物轉移到溶劑的過程中，主要影響因素是黃酮類化合物在所選溶劑中的溶解度。目前常用的有機溶劑有甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、石油醚、丙酮等。其中，乙醇由於甲醇和丙酮的毒性，是提取總黃酮的常用溶劑，而且乙醇相對安全，易於回收。基於乙醇提取白三葉總黃酮的方法主要有回流法和超聲波法。其中回流法是最常用的方法，提取效率最高。回流法是指用揮發性有機溶劑提取白車軸草的成分，將浸提液加熱，蒸去溶劑後再濃縮回流到藥材中，以此類推，直至有效成分提取完全。包括回流熱浸法和回流冷浸法，其中熱浸法溶劑量大，不能循環更新，而冷浸法溶劑量小，提取時可以循環更新，更適合白三葉總黃酮的提取。超聲波提取黃酮類化合物是壹種較新的方法。其原理是利用超聲波在液體中的空化作用來加速植物藥材中黃酮類化合物的提取，也利用機械振動、擴散、粉碎等次生效應來加速被提取物質的釋放。該方法設備簡單，操作方便，提取時間短。白三葉總黃酮提取率為55.5%。此外，還包括壹種基於大孔吸附樹脂的新型提取方法。在白車軸草總黃酮的提取方法中，有陳丹351等人發明的白車軸草地上部分總黃酮純化方法專利和劉東風等人發明的基於超臨界二氧化碳提取白車軸草總黃酮專利，為白車軸草總黃酮提取技術提供了新的方法學支持。

二、黃酮類化合物的測定

目前測定黃酮類化合物的方法很多，主要有分光光度法和色譜法。分光光度法是測定三葉草總黃酮含量最常用的方法，包括直接測定法和顯色直接測定法，直接測定法在黃酮類化合物結構的特征吸收峰波長處測定含量，對於單組分樣品的檢測具有方便、快速、準確的優點。但對於復雜的中藥成分，幹擾因素較多，會影響測定結果，造成較大誤差。另壹種測定總黃酮含量的方法是堿性條件下的顯色法。主要有兩種顯色方法。壹種是NaNO2-A1(NO3)3-NaOH比色法，即在測定過程中依次加入NaNO2、A(NO3)3和NaOH的溶液，生成穩定的紅色化合物，在(505±5)m處比色測定含量，這種方法是目前測定黃酮類化合物應用最廣泛的方法，能有效排除多糖和皂甙。另壹種是氯化鋁顯色法，即在測定溶液中加入氯化鋁溶液，A1+與黃酮類化合物的3-或5-羥基和4-羰基或3 '，4-鄰二酚羥基絡合顯色。413mm處最大吸收色譜技術已廣泛應用於各種天然產物的定性定量分析，常用的色譜技術分為氣相色譜。由於黃酮類化合物的高沸點和熱不穩定性，有必要在氣相色譜之前對樣品進行衍生化。因此，高效液相色譜法被廣泛應用於三葉草總黃酮的測定，也是目前公認的最佳方法。然而，高效液相色譜法存在價格高、分析時間長、分離效率低等缺點。