本研究采用正交試驗篩選大豆異黃酮片的處方，采用高效液相色譜法測定主要活性成分大豆苷元和染料木素的含量。
1儀器和材料
1.1儀器Dionex高效液相系統，Chlomelon色譜數據工作站；南通華宇制藥機械有限公司生產的YP-1.5臺式電動連續單沖壓片機；天津天大天發科技有限公司生產的ZRS-8G智能溶出儀..
1.2材料黃豆苷元和染料木素對照品，購自sigma公司，含量大於99%；大豆異黃酮提取物，異黃酮純度>；90%，購自北京華清美恒公司；十二烷基硫酸鈉(國藥化學試劑有限公司生產)；乳糖(湖州食品化工公司生產)；硬脂酸鎂(上海醫藥輔料廠生產)。
2方法和結果
2.1大豆異黃酮片處方篩選
2.1.1正交試驗篩選配方在預試驗的基礎上，以乳糖為填充劑，10%澱粉漿為粘合劑，硬脂酸鎂為潤滑劑，十二烷基硫酸鈉為崩解劑。選取1000片，乳糖用量，10%澱粉漿用量，硬脂酸鎂用量，十二烷基硫酸鈉用量，每個因素取三個水平，用正交表L9(34)進行試驗，優化處方。表1因子等級表
2.1.2制備工藝:原輔料分別用100目過篩備用。稱取規定量的大豆異黃酮、乳糖和十二烷基硫酸鈉，混合均勻。軟材用適量粘合劑制成，過16目尼龍篩，濕顆粒60℃幹燥60 min，幹顆粒過14目尼龍篩，顆粒分選混合均勻後加入硬脂酸鎂。壓制直徑8 mm、片重500 mg的片劑，硬度控制在(3.5±0.5)kg/mm2。
2.1.3實驗結果和分析實驗結果見表2。表2正交試驗及處方篩選結果
最佳配方為A3B3C2D3，即每公斤大豆異黃酮片，乳糖用量為200 g，10%澱粉漿用量為20 ml，十二烷基硫酸鈉用量為12 g，硬脂酸鎂用量為10 g..四個因素中，因素A，乳糖的用量，其次是十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鎂、澱粉漿的用量，即各因素的影響順序為A >；C & gtD & gt乙.
2.2含量測定
2.2.1色譜柱:Diamonsil TM C18柱(4.6 mm×200 mm，5微米)；流動相:甲醇與0.1%磷酸的比例為42∶58；柱溫:30℃；流速:1.0毫升/分鐘；檢測波長:254納米。
2.2.2對照品溶液的制備分別準確稱取65438±05mg大豆苷元和20 mg染料木素，置於同壹容量瓶中，用無水乙醇定容至50 ml，即得對照品溶液。
2.2.3供試品溶液的制備取3片大豆異黃酮片，粉碎後準確稱取約0.6 g於100 ml的量瓶中，加入80 ml甲醇超聲處理30 min，冷卻後，用甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45微米微孔濾膜過濾，取連續濾液作為供試品溶液。
2.2.4線性關系考察:將2，4，6，8，10，12，14，16 μl大豆苷元和染料木黃酮對照溶液註入高效液相色譜儀，以樣品體積(c)為橫坐標，色譜峰面積(a)為縱坐標。同時回歸方程Y=55.378X-10.789，r=0.9996。結果表明，染料木素濃度在8.0～64.0μg/ml範圍內，峰面積與濃度呈良好的線性關系。
圖1大豆異黃酮片的HPLC圖
(a)對照品的色譜圖，和(b)大豆異黃酮片的色譜圖；1是大豆苷元，2是染料木黃酮)
2.2.5精密度試驗取30.0 μg/ml大豆苷元對照溶液和40.0 μg/ml染料木素對照溶液10 μl，連續進樣6次。大豆苷元和染料木素峰面積的相對標準偏差分別為0.86%和0.78%。
2.2.6穩定性試驗中，分別在0、2、4、8、12和24 h註入相同濃度的供試品溶液10 μl，黃豆苷元和染料木素峰面積的RSD分別為1.641%和0.836%，表明供試品溶液在24 h內，對照品和供試品的HPLC色譜圖見圖1。
2.2.7重復性試驗取同批樣品，按2.2.3的方法制備6份供試品溶液，準確量取10 μl，分別進樣，大豆苷元和染料木素的RSD分別為1.03%和1.16%。
2.2.8回收率試驗:取6個已知含量的樣品，分別加入1.01 mg/ml大豆苷元對照溶液1 ml，取6個已知含量的樣品，分別加入1.85 mg/ml染料木素對照溶液1 ml，按2.2。依次註入10 μl，計算出大豆苷元和染料木素的回收率分別為98.3%和97.1%，RSD分別為1.45%和1.19%。
2.2.9成品含量的測定:稱取不同批次的大豆異黃酮片約0.1 g，準確稱取，按2.3.3方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定。結果見表3。表3成品含量測定結果
3討論
大豆異黃酮片的優化配方為:每公斤大豆異黃酮片，乳糖用量為200 g，10%澱粉漿用量為20 ml，十二烷基硫酸鈉用量為12 g，硬脂酸鎂用量為10 g，放大生產後，條件可控，擠出的片劑外觀光滑，色澤均勻，崩解迅速，口感好。
本文建立的HPLC法測定配方顆粒中大豆苷元和染料木素的含量，操作簡便，重現性好，可有效控制大豆異黃酮片的質量。
黃豆苷元和染料木素是大豆異黃酮片中的主要活性成分，對骨質疏松癥有明顯的防治作用。因此，以大豆苷元和染料木素的含量作為大豆異黃酮片的質量控制指標是合理可行的。