壹、酶解-樹脂法酶解
取100kg新鮮腸黏膜(總固體5%-7%),加苯酚200ml
(0.2%),如氣溫低時可不加。在攪拌下加入絞碎胰0.5-1kg(0.5%-1%)。
用
300-400g/L(30%-40%)NaOH溶液調節pH8.5-9,升溫至40-45℃,保溫2-3h。pH8,再加5kg粗食鹽(5%)升溫至90℃左右,用6mol/L
HCl調節pH 6.5左右,停止攪拌,保溫20min,以布袋過濾,得酶解濾液。
二、鹽解-樹脂法
提取
取新鮮豬腸黏膜投入反應鍋中,按30g/L(3%)加入氯化鈉,NaOH調節pH9,逐步升溫至50-55℃。保溫2h,繼續升溫至95℃,維持10min,冷卻50℃以下,用30目雙層紗布過濾,收集濾液。
豬腸粘膜[NaCl;;NaOH]→[pH9;50-55℃]濾液吸附、洗滌、洗脫、沈澱
取冷卻50℃以下的濾液,加入714型(強堿性)Cl-型樹脂(新樹脂用量為2%),攪拌8h後靜置過夜。
三、CTAB*提取法
(*十六烷基三甲基溴化胺為長鏈季銨鹽)提取、絡合
按豬腸黏膜液(V):Na2SO4(m):硫酸鋁(m):CTAB(V)=1:0.15:0.04:0.001的配料比投料。
取新鮮豬小腸黏膜投入反應罐中,攪拌下加入硫酸鈉,溶解後,用堿液調節pH11-11.5,升溫50℃,保溫攪拌2h。再加硫酸鋁,溶解後,用氫氧化鈉調節pH7.5-8,升溫至95℃,保溫10min。
擴展資料:
肝素的檢測:
1、APTT
APTT依然是作為監測UFH的選擇之壹。它是非常簡單,快速和便宜的項目。然而,卻難以標準化。APTT檢測需要整個凝血瀑布中的所有蛋白都是完整的,從而可以準確測量肝素水平。
2、硫酸魚精蛋白中和試驗
該試驗是基於UFH,壹個高度負電荷的分子,被硫酸魚精蛋白,壹個正電荷的蛋白,中和的原理。配備不同濃度的硫酸魚精蛋白加入血漿中,再加入凝血酶,測量凝固時間。將凝血酶凝固時間恢復至正常的硫酸魚精蛋白濃度就被認為是肝素的濃度。
3、抗Xa活性檢測
發色底物法檢測肝素抗Xa活性的原理都是壹樣的:標本中的肝素與AT形成復合物,抑制過量添加的Xa因子。剩余的Xa因子活性的測量,通過其與特異的底物作用,釋放出pNA來進行。
百度百科—肝素