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谷氨酸棒狀桿菌發酵,為獲取大量谷氨酸,在發酵過程中,工業上采用的方法是什麽?

谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)常用於微生物發酵工程生產谷氨酸來制取谷氨酸鈉(味精),谷氨酸棒狀桿菌作為好氧菌在發酵過程中要不斷地通入無菌空氣,並通過攪拌使空氣形成細小的氣泡,迅速溶解在培養液中(溶氧);在溫度為攝氏30到37度,pH為7到8的情況下,經28倒32小時,培養液中會生成大量的谷氨酸。

谷氨酸的生物合成包括交接途徑(EMP)、磷酸己糖途徑(HMP)、三羧酸循環(TCA)、乙醛酸循環、CO2的固定反應等。其合成途徑大致是:葡萄糖經糖酵解(EMP途徑)和己糖磷酸支路(HMP途徑)生成丙酮酸,再氧化成乙酰輔酶A(乙酰CoA),然後進入三羧酸循環,生成α-酮戊二酸。α-酮戊二酸在谷氨酸脫氫酶的催化及有NH4+存在的條件下,生成谷氨酸。隨發酵的進行,菌體迅速繁殖,導致溶氧供應不足,生成的代謝產物就會是乳酸或琥珀酸,而使pH值降低。

發酵產谷氨酸需要註意以下因素:

1.供氧濃度

供氧不足:積累大量的乳酸,使發酵液的pH值下降,不利於谷氨酸的產生,同時,葡萄糖轉成了乳酸,降低了產物的提出率。

2、銨根離子濃度

它可以影響到發酵液的pH值和產物的形成,是合成谷氨酸的原料;

3、磷酸鹽濃度

要適當,過量會促進EMP途徑,打破EMP與TCA之間的平衡,積累丙酮酸,產生乳酸並積累Val;

4、發酵液中的碳氮比

發酵過程中,應正確控制碳氮比。壹般在菌體生長期碳氮比應大壹些(氮低),在產酸期,碳氮比應小些(氮高)。在碳源和氮源的比為3∶1時,谷氨酸棒狀桿菌會大量合成谷氨酸,但當碳源和氮源的比為4∶1時,谷氨酸棒狀桿菌只生長而不合成谷氨酸

5、生物素

生物素過量時菌體生長繁殖快,細胞膜致密使得細胞內的谷氨酸無法排出,發酵液中由菌種細胞排出的谷氨酸僅能占氨基酸總量的12%;生物素亞適量時,菌體代謝失調,細胞膜通透性增強,細胞內的谷氨酸能及時排出,有利於谷氨酸的積累。因此分不同階段進行控制。

6、發酵溫度

發酵前期應采取菌體生長最適溫度,即30~32 ℃。發酵中、後期菌體生長基本停止, 為積累大量谷氨酸, 應適當提高發酵溫度

7、發酵液pH

pH對細胞的生長和谷氨酸脫氫酶的活性有影響。壹般保持在7.0-7.5

8、通風

通風的實質就是供氧並使菌體和培養基充分混合。谷氨酸產生菌為兼性好氧菌, 在有氧、無氧的條件下都能生長,只是其代謝產物不同。在谷氨酸發酵過程中,通風必須適度。

9、泡沫

谷氨酸發酵是好氣性發酵, 因通風和攪拌產生泡沫是正常的, 但泡沫過多會帶來壹系列問題: (1) 泡沫形成泡蓋時, 代謝產生的氣體不能及時排出,妨礙菌體呼吸作用,影響菌體的正常代謝; (2) 泡沫過多, 發酵液會外溢,造成浪費和汙染; (3) 泡沫過多,易沖上罐頂,造成染菌。

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