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艾滋病核酸檢測的核酸檢測技術

HIV基因結構

HIV基因組由兩條單鏈RNA組成,每條RNA基因組約9.7k,RNA 5’端有壹個帽結構(m7g 5 PP 5’GMP NP),3’端有壹個poly(A)尾。HIV的主要基因結構和組合形式與其他逆轉錄病毒相同,均由5’端重復序列(LTR)、結構蛋白編碼區(gag)、蛋白酶編碼區(pro)、具有多種酶活性的蛋白編碼區(pol)、外膜蛋白(env)和3’端長重復序列LTR區組成。

用磁珠法提取核酸。

磁珠提取原理;

磁珠上標記有特異性吸附核酸的物質特異性吸附核酸,通過磁分離技術從裂解液中提取病毒核酸。

2)步驟:

裂解-吸附-洗滌-洗滌-洗滌-洗脫

3)優勢:

A.磁珠提取特異性高,受樣品因素影響小,靈敏度高。

B.易於實現自動化

4)缺點:

A.成本高,需要壹定的儀器(半自動,全自動)。

B.手工太多了。

應用巢式聚合酶鏈反應(nPCR)檢測技術。

根據HIV-1 gag.pol和env基因序列,設計nesled聚合酶鏈反應(nPCR)引物。外周血單核細胞裂解液用外引物擴增,其產物用內引物擴增,結果直接用凝膠電泳測定。nPCR的靈敏度。比常規PCR高100 ~ 1000倍,可檢測感染者外周血樣本中0.5fg質粒DNA和50μ1HIV-1 HIV基因。

根據專業文獻,63例HIV-1感染者用該方法全部陽性,而61健康人和可疑人全部陰性。後者通過抗體追蹤排除HIV-1感染。

因此,nPCR是壹種靈敏度高、特異性強、操作簡單的HIV-1基因檢測技術。在早期診斷和檢測外周血病毒含量方面發揮了重要作用,具有更廣闊的應用前景。

HIV核酸檢測的優勢

人體感染HIV壹般需要2-12周,檢測血液中HIV抗體平均需要42天左右。在此期間,常規檢測技術根本無法檢測出HIV病毒,通常稱為“HIV窗口期”。“窗口期”的存在也解釋了為什麽有些患者在正規醫院接受輸血後會感染艾滋病。

在感染過程中,首先出現病毒RNA,可以用PCR檢測,然後用雙抗原夾心法檢測IgM抗體,再用間接法檢測IgG抗體。

目前各省市疾控中心和試紙使用的檢測方法都是檢測抗體抗原,無法避免“HIV窗口期”因素的幹擾。因此,在艾滋病毒窗口期,常規檢測技術存在重大缺陷。

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