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DNA測序儀原理

Abi prism 310基因分析儀(即dna測序儀)采用毛細管電泳技術代替傳統的聚丙烯酰胺平板電泳,並使用公司專利的四色熒光染料標記的ddntp(標記終止子法),因此通過單引物pcr測序反應,生成的pcr產物是3 ' ' '端有四種不同熒光染料的單鏈dna混合物,相差1個堿基,這樣四種熒光染料的測序pcr產物就可以在毛細管中電泳,避免了泳道和之間遷移率差異的影響由於分子大小不同,毛細管電泳中的淌度也不同。當分子通過毛細管讀數窗時,激光檢測器窗口中的ccd(電荷耦合器件)攝像檢測器可以逐個檢測熒光分子。激發的熒光被光柵分割,以區分代表不同基底信息的不同顏色的熒光,圖像在ccd相機上同步。分析軟件可以自動將不同的熒光轉換成dna序列,從而達到dna測序的目的。分析結果可以以凝膠電泳圖譜、熒光吸收峰圖譜或堿基排列順序等多種形式輸出。

它是壹種用計算機自動控制,如自動灌膠、自動取樣、自動數據采集和分析,測量dna片段堿基序列、大小和定量的高級精密儀器。Pe還提供凝膠聚合物,包括dna測序凝膠(pop 6)和genescan凝膠(pop 4)。這些凝膠顆粒的孔徑大小均壹,避免了凝膠制備條件不壹致對測序準確性的影響。主要由毛細管電泳裝置、macintosh電腦、彩色打印機和電泳配件組成。計算機包括用於數據收集、分析和儀器操作的軟件。它采用最新的ccd攝像檢測器,將dna測序縮短至2.5h,pcr片段大小分析和定量分析為10 ~ 40分鐘。

由於儀器具有dna測序、pcr片段大小分析和定量分析功能,可以進行dna測序、雜合子分析、單鏈構象多態性分析(sscp)、微衛星序列分析、長片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析。除了常規的dna測序,它還可以進行單核苷酸多態性(snp)分析、基因突變檢測、hla配型和法醫學。

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