胞外細胞因子的檢測:主要檢測血漿(血清)和其他本液中的細胞因子,血漿(血清)中細胞因子的測定。可確切反應細胞因子的表達狀態,某些體液標本如腦脊液、滑膜組織液、支氣管灌洗液、胸腹水等與特定疾病直接相關。 流式細胞術(flow cytometery,FCM)其基本原理是:用刺激劑PMA、ionomycin(離子黴素)體外激活淋巴細胞,用蛋白轉運抑制如黃能黴素(monensin)阻止細胞因子分泌到細胞外,細胞內蛋白質轉運方式被打亂,引起細胞因子向高爾基體積聚,用流式細胞儀便可測出增強細胞因子。這壹技術的發展使得以往通過T細胞克隆方式在幾個月才能回答的問題,在幾個小時內就能得以解決。該技術成為單細胞水平上檢測細胞因子產生的標準分析方法,盡管細胞因子標記流式細胞技術具有其他方法無可比擬的優越性,但是在操作過程中,需要對細胞進行刺激、阻斷、固定、穿透和標記,任何壹個環節都會影響實驗結果[8]。流式細胞儀法常用檢測指標為以CD4設門進行FCM分析。通過CD4+ 細胞中IFN-γ和IL-4的表達來確定TH1/ TH2細胞的百分率[9-10]。以CD3/CD8設門,用FCM檢測分析TH1/ TH2細胞的表達率,結果準確可靠,操作方便快捷,是檢測TH1/ TH2細胞較理想的方法[11-12]。近年來發現CD4+T細胞向不同的方向極化,細胞表面表達不同趨化因子受體(chemokine receptor),趨化因子受體CCR5主要表達於TH1細胞表面,是TH1細胞的特異性標記[14],因此,利用針對趨化因子受體的特異性單克隆抗體來測定TH不同亞群特異笥較高,而且操作較簡單。CCR5和CCR3抗體是最近開發出來的,但只能反映TH細胞數量上的變化,其與功能(細胞因子分泌)的變化不否壹致,有待進壹步的研究。