當前位置:律師網大全 - 專利申請 - 硝酸纖維素膜的應用技巧

硝酸纖維素膜的應用技巧

從這壹節開始,我們開始深入討論膜,談壹些應用技巧。

1.蛋白質與膜的結合原理

蛋白質與膜的結合原理,已知的結合力有疏水力\H鍵\靜電力等。,確切的結合原理還不清楚,主要靠假說支持。有兩個主要假設:

1)先通過靜電力結合,再通過H鍵和疏水作用長時間結合。

2)先通過疏水作用結合,再通過靜電作用長時間結合。

兩個假說都表明,結合過程分為兩步,先結合,後長結合。由於組合原理的模糊性,該領域的工作在很大程度上依賴於實踐經驗。

2.膜對粘接的影響

1)膜孔徑

有些技術人員傾向於用膜孔徑來區分不同的膜,但請註意,這僅限於同壹廠家的產品。如果產品是不同廠家的,這種比較是沒有意義的。上面已經描述了膜孔徑和色譜速度之間的關系。

隨著膜孔徑的減小,膜的實際可用表面積增加,膜結合蛋白的量也增加。用於估計表面積的參數是表面積比(實際可用表面積與所用膜的平坦面積的比率)。

另外,膜的孔徑越小,層析速度越小,金標復合物通過T線的時間越長,反應越完全。

綜合以上兩點,得出膜的孔徑越小,靈敏度越高的結論。但也減慢了運行速度,增加了非特異性結合的機會,即假陽性越高。因此,需要根據測試結果選擇適合實際工程的膜,找到合適的平衡點。

2)不同制造商的膜差異

這種差異主要來自兩點:

1 & gt;生產膜時,使用的聚合物和表面活性劑的來源、種類和數量都不壹樣。同樣,在膜處理中,這兩種物質壹般對性能影響很大。

2 & gt治療過程不壹樣。

3.生物原料、試劑和緩沖溶液的配方

1)生物原料作為CT線的生物原料,在不同的情況下使用,這裏只做簡單介紹。

首先,單克隆抗體與膜的結合優於多克隆抗體,主要是因為多克隆抗體有很多不同的表面位點,每個位點與膜的最佳結合條件略有不同,這無疑增加了優化的難度。

其次,分子量越大,蛋白質越難與固體物質結合。

2)緩沖溶液

人們最關心的可能是獲得壹種性能優異的配方,包括緩沖液、封閉液等等。

事實上,我不能給妳提供壹個通用公式的列表。因為不同的反應體系需要不同的配方來支撐,而且不同機構的反應體系也不壹樣。想要得到“魚”,就要先學會釣魚。為了不誤導大家,我只就以下與公式相關的問題提供思路。具體公式請自行探究。

壹般緩沖液的組成是PBS(或其他緩沖體系)+活性物質(針對某壹特定問題)+PH調節。參考了之前的各種資料,我個人的看法是,配方原則要簡單不復雜,根據自己的需要添加活性物質。很多原來需要添加的活性物質,由於制膜技術的提高,已經不再需要了。

推薦的緩沖體系為0.01M PBS PH7-7.2,對各種抗原和抗體有很好的適應性。

活性物質的情況大致列舉如下:

少量NACL可降低信號強度,消除假陽性。

有機醇(甲醇、異丙醇等。)潤濕薄膜,減少薄膜攜帶的靜電,有利於結合塗層。個人不建議,因為電影制作工藝的提高。

表面活性劑(TW20,TX100)可以增加親水性,避免空心線現象,增加顏色。

糖,保護劑,可以減緩老化速度,也可以增加親水性。

調節酸堿度到壹定的位置,可以消除假陽。

4.樣本環境

環境濕度對薄膜沈積過程非常重要。最佳濕度壹般為45-65%。

濕度過低時,薄膜上容易積累靜電荷,薄膜上容易出現散斑,導致測試中出現疏水斑。

濕度過高時,薄膜上的毛細作用加強,點狀薄膜容易造成CT線變寬甚至擴散。

為了保證采樣時膜濕度的均勻性,通常在采樣前將膜放置在這種濕度條件下壹段時間。

5.取樣儀器與膜表面狀況的關系。

目前采樣方式有兩種,即刮膜式和非接觸點膜式。非接觸點膜式優於刮膜式,進口刮膜式優於國產刮膜式。

因為刮膜法是用軟管刮膜表面的抗體,而膜本身的物理性質又軟又脆,刮膜管會在其表面留下痕跡。由於進口刮膜機采用了更好的材料和控制系統,留下的劃痕較輕,而國產儀器較差,留下的劃痕更嚴重。劃痕容易對層析金標復合物形成抗性,導致假陽性。同時,跑步時如果T線位置有細線(鬼線)也容易出現。

6.膠片的寬度和光點位置

膜的寬度壹般為18mm(或20mm)和25mm,分別用於試紙和測試板。

但是不同的T線采樣位置會帶來不同的靈敏度。當取樣位置上移時,金標化合物通過T線位置的速度會變慢,反應時間增加,靈敏度提高。反之,靈敏度會降低。該方法可用於改變靈敏度和消除假陽性。

7.溶液在膜上的擴散

壹般來說,膜上溶液的樣品量為1ul/cm。

膜上溶液的擴散趨向兩端,噴點是均勻的抗體溶液。但幹燥時,線邊緣的幹燥速度高於中間,中間的抗體會繼續向兩邊擴散,所以幹燥後抗體會聚集在線的兩端。壹般不會影響妳的實驗。如果妳發現線的兩端是紅色的,中間是亮的,妳就要考慮這個問題了。可以加入上面提到的作用物質來解決。

8.貼膜前後的密封效果

從供應商處購買的膠片基本都是經過優化的,可以直接使用。但是,我們經常會遇到關於封閉的討論。

其實封閉並不像大家想的那樣。壹旦關閉,壹切都將迎刃而解。老問題走了,新問題又來了,更麻煩了。我想說的是慎用閉包。

我極度反對先封後點膜的方法。原因是廠家生產膠片的時候,各種配方都是和原漿混合在壹起的。他們在點膜前封膜時,必須將膜浸泡在封液中,這必然會擾亂膜中物質的正常分布。這造成了許多問題,降低了工作效率。有的廠家遇到不封膜就不能覆膜的問題,其實可以用其他方法解決,封膜必然要測。

我常用的密封技術有兩種。

流動被關閉,活性物質在樣品墊上被處理。

膜在固定點密封,活性物質混合成溶液,噴灑在膜的特定位置。這種方法需要使用BIODOT的空氣噴射噴嘴,它可以使不合格的半成品板復活。

只要在膜上做了密封,必然會影響產品的穩定性。具體影響程度要通過穩定性試驗來判斷。

9.膜的儲存

新生產的薄膜壹般含有5-10%的水分。電影的老化機制有理論支持,但有爭議。根據理論,薄膜的老化是由於薄膜上的水分蒸發,使薄膜疏水、帶電、易碎。存放膠片的壹般要求是避光密封。太幹或太濕都是不利的。在這種儲存條件下,壹般可以保存兩年。然而,

由於生產工藝的問題,有些膜在使用後的壹段時間內,其靈敏度會發生變化。如出現此類問題,需將膜訂購後放置壹段時間,待穩定後再投入調試生產。

  • 上一篇:西南醫科大學在哪裏?
  • 下一篇:新品再破圈,這次看名門如何把智能門鎖做到極致?
  • copyright 2024律師網大全