1.蛋白質與膜的結合原理
蛋白質與膜的結合原理，已知的結合力有疏水力\H鍵\靜電力等。，確切的結合原理還不清楚，主要靠假說支持。有兩個主要假設:
1)先通過靜電力結合，再通過H鍵和疏水作用長時間結合。
2)先通過疏水作用結合，再通過靜電作用長時間結合。
兩個假說都表明，結合過程分為兩步，先結合，後長結合。由於組合原理的模糊性，該領域的工作在很大程度上依賴於實踐經驗。
2.膜對粘接的影響
1)膜孔徑
有些技術人員傾向於用膜孔徑來區分不同的膜，但請註意，這僅限於同壹廠家的產品。如果產品是不同廠家的，這種比較是沒有意義的。上面已經描述了膜孔徑和色譜速度之間的關系。
隨著膜孔徑的減小，膜的實際可用表面積增加，膜結合蛋白的量也增加。用於估計表面積的參數是表面積比(實際可用表面積與所用膜的平坦面積的比率)。
另外，膜的孔徑越小，層析速度越小，金標復合物通過T線的時間越長，反應越完全。
綜合以上兩點，得出膜的孔徑越小，靈敏度越高的結論。但也減慢了運行速度，增加了非特異性結合的機會，即假陽性越高。因此，需要根據測試結果選擇適合實際工程的膜，找到合適的平衡點。
2)不同制造商的膜差異
這種差異主要來自兩點:
1 & gt；生產膜時，使用的聚合物和表面活性劑的來源、種類和數量都不壹樣。同樣，在膜處理中，這兩種物質壹般對性能影響很大。
2 & gt治療過程不壹樣。
3.生物原料、試劑和緩沖溶液的配方
1)生物原料作為CT線的生物原料，在不同的情況下使用，這裏只做簡單介紹。
首先，單克隆抗體與膜的結合優於多克隆抗體，主要是因為多克隆抗體有很多不同的表面位點，每個位點與膜的最佳結合條件略有不同，這無疑增加了優化的難度。
其次，分子量越大，蛋白質越難與固體物質結合。
2)緩沖溶液
人們最關心的可能是獲得壹種性能優異的配方，包括緩沖液、封閉液等等。
事實上，我不能給妳提供壹個通用公式的列表。因為不同的反應體系需要不同的配方來支撐，而且不同機構的反應體系也不壹樣。想要得到“魚”，就要先學會釣魚。為了不誤導大家，我只就以下與公式相關的問題提供思路。具體公式請自行探究。
壹般緩沖液的組成是PBS(或其他緩沖體系)+活性物質(針對某壹特定問題)+PH調節。參考了之前的各種資料，我個人的看法是，配方原則要簡單不復雜，根據自己的需要添加活性物質。很多原來需要添加的活性物質，由於制膜技術的提高，已經不再需要了。
推薦的緩沖體系為0.01M PBS PH7-7.2，對各種抗原和抗體有很好的適應性。
活性物質的情況大致列舉如下:
少量NACL可降低信號強度，消除假陽性。
有機醇(甲醇、異丙醇等。)潤濕薄膜，減少薄膜攜帶的靜電，有利於結合塗層。個人不建議，因為電影制作工藝的提高。
表面活性劑(TW20，TX100)可以增加親水性，避免空心線現象，增加顏色。
糖，保護劑，可以減緩老化速度，也可以增加親水性。
調節酸堿度到壹定的位置，可以消除假陽。
4.樣本環境
環境濕度對薄膜沈積過程非常重要。最佳濕度壹般為45-65%。
濕度過低時，薄膜上容易積累靜電荷，薄膜上容易出現散斑，導致測試中出現疏水斑。
濕度過高時，薄膜上的毛細作用加強，點狀薄膜容易造成CT線變寬甚至擴散。
為了保證采樣時膜濕度的均勻性，通常在采樣前將膜放置在這種濕度條件下壹段時間。
5.取樣儀器與膜表面狀況的關系。
目前采樣方式有兩種，即刮膜式和非接觸點膜式。非接觸點膜式優於刮膜式，進口刮膜式優於國產刮膜式。
因為刮膜法是用軟管刮膜表面的抗體，而膜本身的物理性質又軟又脆，刮膜管會在其表面留下痕跡。由於進口刮膜機采用了更好的材料和控制系統，留下的劃痕較輕，而國產儀器較差，留下的劃痕更嚴重。劃痕容易對層析金標復合物形成抗性，導致假陽性。同時，跑步時如果T線位置有細線(鬼線)也容易出現。
6.膠片的寬度和光點位置
膜的寬度壹般為18mm(或20mm)和25mm，分別用於試紙和測試板。
但是不同的T線采樣位置會帶來不同的靈敏度。當取樣位置上移時，金標化合物通過T線位置的速度會變慢，反應時間增加，靈敏度提高。反之，靈敏度會降低。該方法可用於改變靈敏度和消除假陽性。
7.溶液在膜上的擴散
壹般來說，膜上溶液的樣品量為1ul/cm。
膜上溶液的擴散趨向兩端，噴點是均勻的抗體溶液。但幹燥時，線邊緣的幹燥速度高於中間，中間的抗體會繼續向兩邊擴散，所以幹燥後抗體會聚集在線的兩端。壹般不會影響妳的實驗。如果妳發現線的兩端是紅色的，中間是亮的，妳就要考慮這個問題了。可以加入上面提到的作用物質來解決。
8.貼膜前後的密封效果
從供應商處購買的膠片基本都是經過優化的，可以直接使用。但是，我們經常會遇到關於封閉的討論。
其實封閉並不像大家想的那樣。壹旦關閉，壹切都將迎刃而解。老問題走了，新問題又來了，更麻煩了。我想說的是慎用閉包。
我極度反對先封後點膜的方法。原因是廠家生產膠片的時候，各種配方都是和原漿混合在壹起的。他們在點膜前封膜時，必須將膜浸泡在封液中，這必然會擾亂膜中物質的正常分布。這造成了許多問題，降低了工作效率。有的廠家遇到不封膜就不能覆膜的問題，其實可以用其他方法解決，封膜必然要測。
我常用的密封技術有兩種。
流動被關閉，活性物質在樣品墊上被處理。
膜在固定點密封，活性物質混合成溶液，噴灑在膜的特定位置。這種方法需要使用BIODOT的空氣噴射噴嘴，它可以使不合格的半成品板復活。
只要在膜上做了密封，必然會影響產品的穩定性。具體影響程度要通過穩定性試驗來判斷。
9.膜的儲存
新生產的薄膜壹般含有5-10%的水分。電影的老化機制有理論支持，但有爭議。根據理論，薄膜的老化是由於薄膜上的水分蒸發，使薄膜疏水、帶電、易碎。存放膠片的壹般要求是避光密封。太幹或太濕都是不利的。在這種儲存條件下，壹般可以保存兩年。然而，
由於生產工藝的問題，有些膜在使用後的壹段時間內，其靈敏度會發生變化。如出現此類問題，需將膜訂購後放置壹段時間，待穩定後再投入調試生產。