2.微孔板:選擇實驗所需的板數。其余未使用的零件與幹燥劑密封壹起放回原袋中。1.用抗抑制素bB亞單位抗體包被的抗抑制素B包被的微孔板:96孔,2-8 & ordm;c密封保存。
2.標準A/樣品稀釋液:2ml× 1瓶,胎牛血清,含0pg/mL二聚體抑制素b .使用前2-8 &;ordm在C. 2-8&下保存;ordmc可以保存2周。on-20 & ordm;c可以保存很久。
3.標準B-G(inhibinbstandsb-G):1毫升× 6瓶,胎牛血清,含濃度為10、30、100、250、500、1000皮克/毫升的二聚體抑制素B。使用前2-8 &;ordm在C. 2-8&下保存;ordmc可以保存2周。on-20 & ordm;c可以保存很久。
4.抑制素對照:1毫升× 2瓶,濃度I和II,胎牛血清,含低濃度和高濃度抑制素A二聚體。使用前2-8 &;ordm在C. 2-8&下保存;ordmc可以保存2周。on-20 & ordm;c可以保存很久。
5.樣本稀釋液A: 10 ml× 1瓶,2-8 & ordm;保存在c下。
6.樣本稀釋液B: 10 ml× 1瓶,2-8 & ordm;保存在c下。
7.抗體-生物素結合物(即用型):10ml×1瓶,含生物素標記的抗抑制素A亞單位抗體。2-8 & amp;ordm保存在c下。
8.鏈黴親和素-酶偶聯物(即用型):10ml×1瓶,內含鏈黴菌和辣根過氧化物酶的組合。2-8 & amp;ordm保存在c下。
9.TMB底物溶液:15ml× 1瓶,2-8 &;ordm保存在c下。
10.終止液:15ml× 1瓶,含0.2M硫酸。2-8 & amp;ordm保存在c下。
11.洗滌濃縮液:100 ml× 1瓶,2-8 &;ordm保存在c下。所有試劑應平衡至室溫(~ 25 &;ordmc)充分混合。標準品、質控品和待測樣品應同時制成壹式兩份。
1.取出實驗需要的板條,記錄每個孔的位置。
2.將50微升標準品、質控品和待測樣品加入相應的孔中。
3.向每個孔中加入25ul樣品稀釋劑A。
4.向每個孔中加入25ul樣品稀釋劑B。
5.封板,以300-400rpm的速度搖動,室溫過夜(14-18小時)。
6.將板子洗3遍,用吸水紙拍幹。
7.向每個孔中加入50微升抗體-生物素結合物。
8.密封平板,以500-700rpm的速度搖動,並在室溫下孵育65438±0.5小時。
9.將板清洗6次,然後在吸水紙上拍幹。
10.向每個孔中加入50微升鏈黴菌和辣根過氧化物酶的混合物。
11.密封平板,以500-700rpm搖動,並在室溫下孵育20分鐘。
12.洗板6遍。最後壹次沖洗後,將洗液留在孔內15分鐘後再取出。用吸水紙拍幹。
13.向每個孔中添加100ulTMB底物溶液。
14.以500-700轉/分的速度搖動,並在黑暗的室溫下孵育15-30分鐘。
15.向每個孔中加入100ul端接溶液。
在16.30分鐘內讀取450nm。
註意:零標準必須為空白。如果能實現雙波長測量,可以在600或620nm讀取,從450nm減去600(620)nm的吸收值,可以減少光學誤差。使用血清樣品通過靜脈穿刺收集血液。樣品取自2-8 &;ordmc可存放24小時,-20 &;ordmc或以下可保存30天。避免樣品的反復冷凍和解凍。不應使用溶血性或血脂性樣本。實驗前,冷凍樣品應解凍並徹底混合。