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核酸診斷的研究歷史

聚合酶鏈反應

核酸研究已有100多年的歷史,本世紀60年代末、70年代初人們致力於研究基因的體外分離技術,Korana 於1971年最早提出核酸體外擴增的設想:“經過DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,並不斷重復該過程便可克隆tRNA基因”。

1983年的壹天,美國科學家Kary Mulis驅車在蜿蜒的州際高速公路上行駛中,孕育出了PCR技術的原型。他在實驗上證明了PCR的構想,並於1985年申請了有關PCR的第壹個專利,在Science雜誌上發表了第壹篇PCR的學術論文。從此PCR技術得到了生命科學界的普遍認可,Kary Mulis也因此獲得了1993年的諾貝爾化學獎。 Mullis最初使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶 I的Klenow片段,其缺點是酶不耐高溫,90℃會變性失活,每次循環都要重新加。 1988年Saiki等人從溫泉中分離的壹株水生嗜熱桿菌中提取到壹種耐熱DNA聚合酶,克服了這個缺點,從而使PCR技術得到了廣泛的應用,也使PCR成為遺傳與分子分析的根本性基石。

經過十幾年的發展,PCR成為實驗室的常規技術。它是現代分子生物學研究中不可缺少的手段,是壹種極為敏感的放大系統。相比於傳統的臨床診斷方法,核酸診斷是分子水平上的診斷技術,可以彌補傳統臨床診斷方法的某些缺陷,比如,核酸診斷能直接揭示病原體的存在,能客觀反映病原體在人體內感染及活動情況,可以作為臨床治療中的壹個有效監控手段,另外采用核酸診斷技術還可以檢測到常規檢測方法難以檢測到的病原體,例如可以克服酶免檢測技術中從感染到抗體產生的窗口期問題。因此,以PCR技術為代表的核酸診斷技術在臨床診斷中得到日益廣泛的應用。

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