我們擁有13年的文庫構建經驗，已完成數千個各類文庫構建，所采用的技術以及試劑盒均為市場上質量最好的文庫構建試劑，保證所構建的每壹個文庫各項指標均為市場上最高標準，我們構建文庫的成功率為98%以上。關於我們的文庫構建產品，我們承諾的指標如下，各項指標在國內各家公司裏是最高的。
上海寶吉結合多年的文庫構建經驗，強勢推出“All-Direct”文庫構建技術，我們的產品較其他構建方法（主要有takara的SAMRT方法和invitrogen的gateway方法），技術和質量上都具有極大的優勢。
關於我們的文庫構建產品，我們承諾的指標如下，各項指標在國內各家公司裏是最高的:
原始文庫庫容量大於1*10^7CFU；
平均插入片段大於1200bp；
克隆陽性率大於95%。
? 1.我們是采用同源重組的方法構建文庫，沒有經過任何的內切酶切割和連接過程，確保不會出現基因被酶切切斷的情況，能夠保證基因的完整性，而Clonetech的是用酶切連接的方式構建的。
? 2.由於我們采用的是重組的方式把cDNA重組到載體上，相對clonetech的SMART的T4連接酶的方法效率要高的多，我們承諾原始庫的庫容量在1*10^7以上。而且重組的方式假陽性很低，我們這裏有的客戶壹次測3萬個克隆，都沒有出現壹個空載的情況，我們承諾陽性率大於98%，這是酶切連接的方法遠遠無法比擬的。
? 3.Clonetech的SMART方法是用PCR的方法合成第二鏈的，由於PCR的選擇性抑制及競爭性擴增，這樣就會造成基因冗余度非常高，低豐度的基因PCR擴增不到，會丟失掉，長片段的基因也會丟失掉，另外會造成重復序列非常多，特別是起始的RNA樣本量少的情況（比如5ug RNA以下就需要進行15個循環以上的PCR擴增，大大降低文庫質量),，大大降低文庫包含的基因數量，而我們的cDNA合成方法是用多種酶在16度恒溫的條件下直接合成第二鏈的，這樣就完全忠於樣本自身的基因情況，不會人為的改變樣本內的基因情況以及基因大小，大大提到文庫的質量。
4.我們是采用的壹種高質量的反轉錄酶，該反轉錄酶是公認的最好的反轉錄酶，較clonetech的反轉錄酶具有反轉錄溫度高（55攝氏度反轉，clonetech的反轉錄酶是使用42度反轉，較高的溫度可以打開RNA的二級結構，可以獲得更長的cDNA），反轉錄效率和cDNA長度要好的多。我們承諾文庫的平均插入片段在1.3Kbp以上，最低長度也在1Kbp以上，而clonetech的SMART方法構建出來的文庫壹般只有幾百BP。
文庫構建流程:
1.RNA提取
2.mRNA提取
3.cDNA的酶促法合成
4.cDNA連接接頭
5.cDNA按長度分離
6.cDNA與酵母雙雜交文庫載體(pGADT7或者pDEST22)進行all-direct重組
7.重組產物電轉化
8.文庫檢測以及質粒提取
3.1 All-direct方法與SMART方法的比較與優勢
3.2? All-direct方法與Gateway方法的比較與優勢
25個工作日內，如需轉化酵母延長15個工作日。
備註1：該酵母文庫可以選擇增加均壹化處理步驟，我們使用DSN法均壹化方法，可以構建出高質量的均壹化酵母雜交文庫，可以大大減少後續酵母篩選的工作量和篩選效率等。
客戶構建指定的酵母雙雜交cDNA文庫，由客戶提供組織、細胞或總RNA給我們即可：
細胞樣本：細胞數量大於1*10^7
動物樣本：大於1g
植物樣本：大於2g
總RNA：大於200ug
目前我們已經成功完成數千個不用樣本的文庫構建，主要客戶為中國科學院上海植物生理生態研究所、上海交通大學、浙江大學、浙江省農科院、山東省農科院等多家單位完成酵母雙（單）雜交文庫構建服務，物種包括人、小鼠、大鼠、水稻、擬南芥、牡丹、稻飛虱、蘋果、油菜、小麥、貝殼、葡萄、真菌等。
我們是國內極少數能同時提供文庫構建和文庫篩選的公司，對於酵母雙雜交篩選服務，您只需要提供誘餌基因序列即可，我們會進行以下工作，篩選的報價為3萬元整:
1.誘餌載體的測序驗證以及構建到雙雜交篩選載體上
2.誘餌基因的自激活檢測，檢測通過後繼續下壹步實驗。
3.誘餌質粒轉化酵母細胞，驗證合格後再轉化文庫質粒
4.酵母篩選和3AT條件優化
5.篩選結果的測序
6.篩選結果的回轉驗證
7.篩選結果遞交:包括篩選報告，篩選結果的測序結果和blast結果，篩選結果克隆的質粒實物。
9.1.如何選擇合適的文庫構建方法進行建庫？
※ 我們是市場上唯壹可以同時提供3種文庫構建方法的公司，這也足以看出我們公司的技術實力。
※ 3種方法的比較如下：
? 1) Clonetech 的SMART方法，該方法基本是被淘汰的，我們上文有詳細的技術比較，其唯壹的好處就是RNA的起始量可以很小，壹般只需要幾ug即可，該方法成本很低，壹般不建議選擇。
? 2) Invitrogen的方法，該方法質量上較SMART方法要好很多，其對試劑的質量要求也很高，必須全部使用invitrogen的原廠試劑。我們全部使用invitrogen公司試劑進行構建，且做了壹些技術改進，提高了文庫質量。該方法對起始的RNA要求較高，建議起始用量是大於200ug。但該方法有壹個嚴重的缺點，就是需要進行兩次重組才能得到酵母文庫，而多壹次重組就會多壹次文庫擴增過程，會嚴重影響文庫質量。在上文中有詳細的技術比較和介紹。
? 別的使用該方法建庫的公司，只能完全使用商業化的試劑盒構建文庫，沒有做任何改進。且由於進貨渠道的原因，試劑盒內的有些試劑他們是買不到的，質量就會大打折扣。比如DH10B 電轉化感受態細胞，這個感受態細胞轉化效率比國產的高出100倍以上。這個感受態細胞需要具有很多的海關批文才能買到，其他公司由於沒有相關資質，是無法進口的。
? 3) All-Direct專利方法，這個是我們的獨家專利方法，是在invitrogen方法上做了重要改進，保留了其優點（不用PCR擴增，文庫保真度高），去除了其需要經過兩次重組的缺點，大大提高文庫質量。平均長度較invitrogen方法可以提高200bp，庫容量可以提高10倍以上。該方法對RNA的要求量和invitrogen方法壹樣。
9.2.寶吉生物提供的酵母雙雜文庫有哪些產品內容？
※ 我們提供的文庫產品，包含了文庫質量（大於200ug）以及大腸桿菌文庫甘油菌。同時可以選擇提供轉化到酵母細胞的文庫甘油菌，我們會提供100只轉化到酵母細胞的文庫甘油菌，可以做100次的文庫篩選。
※ 其中文庫質粒可以使用***轉的方法進行文庫篩選，酵母細胞文庫甘油菌可以使用maiting的方法進行文庫篩選，根據老師的實驗習慣可以自由選擇，結果沒有任何差異的。
9.3.如何檢測文庫質量？
※ 對於文庫的質量，壹個簡單的金標準就是，樣本內的所有基因都在文庫裏，且基因要有壹半以上的全長基因，這個文庫就是合格的。
※ 對於文庫的檢測，可以針對我們交付的產品，做以下幾個方面的檢測：
根據老師的樣本信息，選擇3-5個低拷貝的基因，設計合成引物，以我們提供的文庫質粒為模板，進行PCR擴增，如果低拷貝的基因都能擴增出來，高拷貝的就不會丟失，文庫質量即可以判斷為合格。
※ 對於我們提供的大腸桿菌文庫甘油菌，可以進行梯度稀釋後鋪板培養，第二天計算庫容量，同時挑取單克隆進行PCR擴增和測序檢測，以判斷插入片段長度和空載率。
9.4.如何評價文庫質量？
※ 文庫質量的關鍵指標，主要是文庫庫容、空載率及插入片段平均長度。
※ 文庫的原始庫容肯定是越高越好，我們公司承諾的是大於1*10^7的庫容量，這個是原始庫容量，也就是沒有經過任何擴增過程，直接轉化出來的庫容量。比其他公司承諾的1*10^6的庫容量要高10倍以上，下面詳細解釋下庫容量的高低對文庫質量的影響:
※ 生物樣本，除了低等生物，目前研究比較多的物種，比如人，大鼠，小鼠，其基因數在5*10^4左右，文庫至少得100倍覆蓋，也就是庫容至少需要5*10^6以上。
※ 對於植物樣本，其基因數量比人的大很多，比如水稻樣本，其基因數量為人的2-3倍，小麥樣本，其基因數量為人的5-6倍，這樣就需要更多的文庫庫容量。對於水稻樣本，需要覆蓋100倍的基因數，要求的文庫原始庫容量是大於1*10^7以上。市場上別的公司提供的文庫最多只能覆蓋10倍左右，這麽低的覆蓋度，必然造成大量基因的丟失。
※ 對於有的公司宣傳的，庫容量不是越高越好，這絕對是不負責任的忽悠，為自己的文庫質量不合格找不合理的借口。
※ 對於插入基因長度，別的公司壹般平均長度就在800bp左右，我們公司可以承諾做到1200bp以上，這個差距是巨大的，下面再 詳細介紹下插入片段長度對文庫質量的影響：
※ 壹般的壹個功能基因，其壹般長度會在200個氨基酸以上，也就是編碼區在600bp堿基以上，裝入文庫的基因，除了編碼區，還會有5’UTR區，3‘UTR區以及polyA區域，這幾個部分加起來，基因的長度壹般至少會在1000bp以上。由於文庫是個混合物，會存在競爭性抑制，短的基因過多，勢必會影響長度基因的比例，以及長的基因的表達豐度。
※ 我們的文庫產品，插入片段平均長度會在1200bp以上，最短的會在1000bp左右。對於文庫篩選，不是說只要有基因的壹個片段就可以了，蛋白質的功能需要多種因素的參與，如果插入基因過短，篩選到的結果只是壹個基因片段，甚至是靠近polyA的壹小段基因，這個結果的可行度在哪裏？基本都可以認為是假陽性的結果的。
※ 對於有些公司宣稱的，文庫的基因插入片段不是越長越好，其實是對客戶的極其不負責任和不合理的忽悠，只是因為自己沒有技術做到更長的片段長度，而找的理由。
9.5. Mating和***轉兩種篩庫方法哪種好？
***轉和maiting兩種方法，結果是壹樣的，只是壹個文庫質粒轉到酵母細胞的方法，對於後續的文庫篩選沒有任何區別的，可以根據老師的實驗習慣，自由選擇的。