ShRNA可以在幹細胞、神經細胞、胚胎幹細胞等難以轉染的細胞中高效表達蛋白質。他的啟動子都是外源的，表達蛋白的翻譯後修飾可能不夠真實，TALEN可以更好的彌補他的缺陷。首先，構建了目標識別模塊。TAL的核酸識別單位是重復的34個恒定氨基酸序列，其中12和13位的雙氨基酸與A、G、C和T有恒定的對應關系，即ng識別T，HD識別C，NI識別A，NN識別G..為了獲得用於鑒定特定核酸序列的TALE，只需要根據DNA序列連續克隆相應的TAL單位。由於物種的基因組大小不同，所選擇的特定序列的長度也不同。對於哺乳動物，包括人類，壹般選擇16-20bp的DNA序列作為識別目標。第二，
塔倫基因敲除
核酸內切酶TALEn可以通過將識別特定DNA序列的Tale與核酸內切酶FokI偶聯來構建。而且FokI需要形成二聚體才能發揮活性，大大降低了隨機剪切的概率。在實際操作中，需要在目的基因的編碼區或外顯子與內含子的交界處選擇兩個相鄰(相隔13-22個堿基)的目的序列(壹般為16-20個堿基)分別構建TAL識別模塊。將兩個相鄰的靶識別模塊融合，克隆到FokI的N端，形成真核表達載體，獲得TALEN質粒對。
可以通過將TALEN質粒對轉移到細胞中來敲除目標基因。通過TALEN質粒將* * *轉入細胞後，表達的融合蛋白分別與靶位點特異性結合。由於兩個TALEN融合蛋白中的FokI相互靠近，形成二聚體，發揮非特異性內切酶的活性，在兩個靶位點之間切割DNA，形成DSB(雙鏈斷裂)，誘導DNA損傷修復的機制。細胞可以通過NHEJ(非純合末端連接)來修復DNA，在這個修復過程中或多或少地缺失或插入壹定數量的堿基，導致移碼，形成目的基因敲除突變體。
TALEA的轉錄激活
識別特定DNA序列的TALE與轉錄因子激活結構域VP64融合，以構建識別啟動子上特定DNA序列的轉錄激活因子TALEA。在實際操作中，需要選擇目標基因啟動子上遊的目標序列(壹般為12-18堿基)來構建TAL識別模塊。將識別模塊TALE融合並克隆到VP64的N端，形成真核表達質粒TALEA。將TALEN質粒轉入細胞，表達的融合蛋白與啟動子附近的特定DNA序列結合，並通過VP64激活區與Pol II結合，從而激活基因轉錄，提高內源目的基因的表達。