什麽是梯度PCR？

對於壹個PCR反應，雖然有各種PCR引物設計軟件或者經驗公式來計算最佳退火溫度，但是由於模板中堿基的組合千變萬化，經驗公式得到的數據對於特殊的片段可能並不是“P”，稍有變化就可能對結果產生決定性的影響，所以“感受條件”壹度很頭疼。梯度PCR的出現部分解決了壹些問題——反應過程中可以根據指定範圍內的梯度改變各孔的溫控條件，根據結果壹步找到最合適的反應條件。不僅可以優化退火溫度，還可以優化變性溫度和延伸溫度——這對於Invitrogen、Clontech和Promega等大多數高保真Taq酶的擴增非常重要，因為Taq和校正酶的最佳反應溫度可能存在顯著差異，因此優化延伸溫度非常重要。在壹臺儀器上可以完成多個實驗，不僅節省了實驗時間，提高了效率，還節約了實驗成本。對於具有梯度功能的PCR儀器，需要考慮梯度模式下不同梯度管之間的溫度均勻性和準確性，以及儀器在梯度模式和標準模式下是否具有相同的溫度特性。這種差異可能導致在梯度模式中獲得的最佳條件和單獨在標準模式中獲得的結果之間的差異。SteadySlope技術是eppendorf擁有的梯度PCR技術專利，可以以相同的溫度變化率達到所有設定的梯度溫度，因此在梯度模式下具有恒溫性。該技術保證了梯度模式和正常模式之間可靠的信息傳遞，不會因溫度特性不同而導致產量和特異性的變化。MJ選擇在梯度模式下使用不同的冷卻速率，不需要支付專利費，每個梯度溫度之間的溫度曲線也不壹樣，所以從梯度模式切換到正常模式可能會有問題。此外，采用TCT(三環)技術的梯度PCR儀在梯度PCR模式下增加了加熱和冷卻控制區，保證了梯度控溫的準確性，使不同梯度管之間的溫度均勻性更好。在PCR儀上增加原位PCR模塊，可以在載玻片上進行原位PCR擴增。MJ和eppendorf PCR儀器都提供原位適配器，以滿足不同的需求。對於從事醫學研究的工作者來說，購買壹臺配備了支持原位PCR的模塊的PCR儀是值得的。另外，隨著基因組高通數量研究的需求越來越大，各個品牌都推出了多通道高通數量PCR儀，各有特長:MJ有壹種壹拖四，就是1主機，有四個擴增槽，每個槽可以獨立控溫，壹次可以PCR 96 x4個樣本，但是壹旦出現問題，四個都不能用。在原有9700的基礎上，ABI推出了雙384孔基座，壹次可以完成384x2個樣品，使9700的功能可以擴展到高通測量領域，而無需購買新的機器。可惜兩個384罐不能獨立控溫。