對於多個分子生物學和基因組學應用,從克隆和PCR到基因組測序和芯片分析,DNA純化都是必經之路。然而,選擇最佳的純化試劑盒卻並非易事。例如,在您純化基因組DNA時,您需要壹個試劑盒,能溫和地處理核酸,同時又不分離質粒DNA。而且,新壹代測序技術對樣品的要求頗高,我們也需要壹些專門的產品來純化DNA。在此,我們介紹壹些新選擇。
鹽沈澱方法
Epicentre(Illumina旗下公司)的MasterPure? Complete DNA Purification Kit采用壹種專利的鹽沈澱方法。這壹系列試劑盒覆蓋各種樣品類型,包括血液、固定組織、植物、酵母、昆蟲等,在短短30分鐘內可帶來高產量的核酸,而損失極少。
據Epicentre的資深產品經理Cristine Kinross介紹,有了這些試劑盒,用戶在測序或其他分子生物學應用的樣品制備之前無需再進行額外的純化。它們可去除蛋白及其他細胞碎片,而不引入那些必須去除的毒性化合物,從而避免了多次洗滌,並改善核酸產量。
Kinross談道:“利用MasterPure回收核酸的出色純度讓樣品可直接進入測序文庫的制備。”當然,對於其他應用,包括芯片、qPCR和克隆,它也是適合的。此外,這個試劑盒也能用於RNA的純化。在獲得總的核酸後,經過DNase處理,就能得到總RNA。
多種試劑盒
Promega提供廣泛的核酸純化試劑盒,采用幾種不同的策略。例如,Wizard? Genomic DNA Purification Kit是基於經典的沈澱法,可從全血、組織培養細胞、動物及植物組織、酵母和細菌中提取基因組DNA,靈活高效;而ReliaPrep? 系列試劑盒采用柱提法,簡單快速。此外,Promega還提供基於磁珠純化的試劑盒。
Promega公司基因組學的全球產品經理Eric Vincent表示:“盡管溶液的確切組分會有不同,但裂解、結合、洗滌和洗脫的基本過程適用於不同的結合方法(如矽膠或纖維素),不同的純化形式(純化柱或磁珠),以及手動和自動純化操作。”對於壹些非常重要的樣品類型(如FFPE樣品),還需要壹些專門的操作或處理。
“我們開發了獨特的結合/洗滌緩沖液,它們能有效去除抑制下遊反應的物質,而優化的系統讓研究人員能夠捕獲少量的核酸並以小體積(不到30 μl )洗脫,我們還開發出自動化的解決方案,適合各種試劑和通量,”Vincent說。
這些試劑盒提供了完整的解決方案,能夠以極小的體積洗脫核酸,同時又避免抑制劑殘留在洗脫液中。經過這些試劑盒純化後,核酸可用於PCR、Sanger測序、新壹代測序、芯片等下遊分析。