“極端嗜鹽菌是壹大類廣泛存在於海水成鹽場所、鹽湖甚至古代海洋沈積物等高濃度鹽環境中的極端微生物,約有18個屬。”向華說,“極端嗜鹽菌富含極端嗜鹽酶、特殊脂質、生物表面活性劑、蛋白質抗生素(嗜鹽菌),以及重要的生物納米材料‘紫膜’和生物降解塑料前體PHA。我們現在工作的目的是在極端嗜鹽古菌中構建壹個通用的基因操作平臺,開發、轉化和利用極端古菌的重要功能物質。”
完成了國際上首個極端嗜鹽嗜堿古菌質粒的全序列測定和遺傳分析,成功構建了多個具有自主知識產權的克隆表達載體。
“我們在極端嗜鹽古細菌的分子生物學方面取得了重要進展,特別是在基因操作平臺領域。”向華透露,研究人員已從不同類群的極端嗜鹽古細菌中分離出多個質粒,進行了詳細的分子機制分析,成功構建了多個具有自主知識產權的克隆表達載體,並已申請多項國家發明專利。關於其研究過程,向華說,“我們對約30株極端嗜鹽古菌進行了質粒調查,從其中壹株中分離出壹個新的質粒。全序列測定表明,該質粒大小約為2.5kb,含有三個開放閱讀框,位於質粒的同壹條鏈上。”據介紹,該研究完成了世界首個極端嗜鹽嗜堿古菌質粒的完整測序和遺傳分析,論文已發表在極端微生物學國際專業期刊《Extremophiles》上;基於該質粒的新型載體系統已成功轉化多種極端嗜鹽菌,並完成了幾種受體菌的限制性修飾系統分析。論文還在國際雜誌上發表,並申請了國家發明專利。
在國際上首次發現了嗜鹽細菌素可能的抗性基因。克隆了嗜鹽細菌素可能的調控基因和轉運加工基因,完成了極端嗜鹽古細菌中最小質粒的克隆和全序列測定。
在另壹項研究中,工作人員對60多株中性極端嗜鹽菌進行了質粒調查,發現了壹個新的質粒,並完成了分離克隆、完整測序和GenBank註冊。研究表明,這類質粒可能代表極端嗜鹽古菌的壹個新的質粒類型,具有較高的理論價值。由於這項工作的獨創性和明確的應用前景,其構建的載體受體系統也已經申請了國家發明專利保護。此外,向華課題組的研究人員還發現、分離純化了壹種抗菌譜廣、性質穩定的新型蛋白質抗生素,並完成了其理化性質、氨基酸序列和抗菌譜分析,進而完成了其基因克隆和測序;最近,在國際上首次發現了嗜鹽細菌素可能的抗性基因。克隆了極端嗜鹽古菌的熱誘導啟動子,首次確定了其轉錄起始位點並分析了其可能的調控機制。研究團隊還克隆了嗜鹽細菌素可能的調控基因和轉運加工基因,完成了極端嗜鹽古菌中最小質粒的克隆和全序列測定。
向華說,自2002年6月項目啟動以來,研究團隊已經構建了兩個不同系列的載體受體系統,並申請了兩項國家發明專利。在國際專業SCI雜誌發表論文3篇;在GenBank中註冊了7組新基因序列(包括約12個新基因和6個以上的調控元件)。論文發表後,引起了該領域國際學術界的關註,產生了積極影響。佛羅裏達大學和俄羅斯科學院的兩個實驗室也表達了合作意向。