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什麽是外來體保存液?

外泌體樣本是對外泌體進行實驗的基礎,很多童靴認為這是最簡單的。如果妳真的這麽想,那妳就大錯特錯了。采集樣本有不同的要求,壹個比壹個重要。那麽我們如何選擇我們的實驗樣本呢?采樣時需要註意什麽?如何保存分離出來的外來體?

壹、外來體樣本的選擇及註意事項

不同的實驗樣本在采集時需要註意的點不同。妳在研究什麽樣的樣本,需要特別註意哪些方面?看下面的解釋:

1,細胞上清液

選擇細胞培養上清液作為外來體分離的實驗材料,不會像血液樣本壹樣存在樣本量限制的問題,而且操作簡單,可以直接離心。但在細胞培養過程中應註意汙染、培養時間、細胞死亡率和FBS。和所有的細胞實驗壹樣,培養過程中不允許汙染,但有些培養的細胞本身攜帶病毒基因組,在培養過程中會釋放出病毒顆粒,這就要看病毒顆粒是否會影響後續的實驗。

壹般來說,細胞在培養24-48h後可以分離出外來體。特殊情況下,如果在培養基中加入特殊的化學物質,培養15-60min後即可收集。因為細胞死亡會分泌小體,所以在研究外來體時,細胞死亡率必須控制在5%以內。未處理的FBS中含有大量的外來體,因此必須使用處理過的無外來體的FBS進行細胞培養。

2.唾液

唾液的成分會隨著取樣的位置和時間而變化,所以需要像血樣壹樣固定和定時。唾液主要由舌下腺、頜下腺和腮腺分泌,所以不同位置的唾液成分不同,收集時需要固定位置或收集全部唾液。不同時間段唾液成分會有所不同,需要定期服用。其他的,比如抽煙,吃東西,都是被禁止的。壹般來說,建議采樣1h內不要吃東西,包括飲料,也不要劇烈運動,在平靜的狀態下采樣。最後,不要刷牙。

3.血

在第壹次外分泌課程中,許多學生就血清和血漿的選擇提出了問題。我們應該選擇哪壹個?血漿=血液-血細胞血清=血漿-纖維蛋白原-凝血因子

如果分不清兩者的區別,找出血清的來源就能牢牢記住。血清是血液凝固後收集的液體,所以缺乏纖維蛋白原、凝血因子和大量凝血產物。纖維蛋白原可轉化為纖維蛋白,具有凝血功能。血小板在凝血過程中會分泌大量的外來體,有研究發現血清中有近50%的外來體來自額外分泌。所以壹般實驗都選擇等離子。在特殊情況下,比如血小板相關疾病的研究,當然血清更合適。

受樣本限制,血樣壹般為2ml。抽血需要註意什麽?在研究外來體的血液樣本時,壹個經常被忽視的問題是針頭的大小。抽血過程中,血液流經針頭時,會產生剪切力。如果針太細,剪切力大,會使細胞破裂或刺激血小板分泌外泌體,影響後續實驗。有文獻報道21號針頭更適合用於外分泌研究的血樣采集。其他如采血地點、人體生理周期、飲食周期、時間周期(24h)等都會影響樣本中的外泌體。所以采樣的時候,盡量做到固定,定時。最後,需要註意的是,樣本應在采血後30分鐘內進行處理,因為血液在采集管中采集時,血細胞和血小板也會分泌外泌體。

4、流鼻涕

研究鼻涕有壹個特殊的價值,可以探索治療性的外來體。什麽是治療性外來體?在腦部疾病的治療中,可以將藥物作為外泌體註入鼻腔,使藥物避開血腦屏障。鼻涕的收集與很多環境因素有關,如年齡、季節、性別、城市、過敏史、職業風險等。鼻涕的采集沒有統壹的標準,只要保證所有樣本采樣方式壹致即可。

5.尿

在尿液取樣中,除了性別、年齡、飲食的影響外,還有壹個特別的點就是尿液的新鮮度,是指尿液在膀胱內存在的時間。

6.牛奶

乳汁中的外來體和抗體會影響新生兒的發育,有很大的研究價值。泌乳的階段、胎次、飲食、產奶量、哺乳、母親的健康狀況、精神狀態都會影響外泌體的分泌。需要註意的是,牛奶中含有大量的脂蛋白,會影響後期外泌體的分離。

7.腦脊髓液

腦脊液研究的難點主要在樣本的獲取,樣本中缺乏外泌體,使其雪上加霜。那這個問題怎麽解決呢?國外可以購買商業正常樣本,也可以使用其他疾病樣本作為對照。

第二,外來體的保存

對於外泌體的保存,和其他分子樣品壹樣,提取的外泌體可以低溫保存,可以短時間(壹周內)放在4度,長時間放在-20或-80。有人認為放在4度比較好,怕低溫凍融影響外泌體的完整性,但目前還沒有定論,多數文獻認為沒有影響。那應該放多少度呢?有壹招,分包-20或者-80,是否合適。

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