壹、篩選營養缺陷型菌株的壹般步驟和方法
①紫外線、化學誘變劑等物理方法誘導大量營養缺陷型菌株。用15W或20W紫外線燈在15cm ~ 30cm處照射10s ~ 20min。照射受試菌前，燈管應預熱20min以穩定光線。應通過磁力攪拌細菌懸液，使所有單細胞或單孢子受到均勻照射。應特別註意在黑暗或紅外線下的操作。接種後，器具應用黑布包裹嚴密，防止恢復可見光。
②野生型的排除
a)抗生素法有些抗生素能殺死正在生長和繁殖的微生物，但對靜止的微生物沒有殺滅作用。如青黴素能抑制細菌細胞壁肽聚糖的生物合成，制黴菌素能破壞真菌細胞膜，分別殺滅細菌和真菌。
b)菌絲體過濾法適用於絲狀微生物，如放線菌和黴菌。在基本培養基中，野生型孢子可以萌發生長成菌絲體，營養缺陷型孢子不生長。將誘變後的孢子接種到液體基礎培養基中，振蕩培養10h ~ 12h，使原營養型萌發(只要肉眼能看到菌絲)，然後用濾紙、棉花或玻璃過濾漏鬥過濾，菌絲被濾出，使未萌發的缺陷孢子順利通過，從而達到富集營養缺陷型的目的。
③檢測缺陷類型的常用方法。
a)逐個測定法(點種法)是在完全培養基上塗布分離誘變處理和消除野生型後的菌液，將培養後生長的每個菌落分別點在基本培養基和另壹種完全培養基上。任何不能在基本培養基上生長，但能在完全培養基的相應位置上生長的菌落，說明它是營養缺陷型的。
b)將三明治培養法中的誘變菌液稀釋，與基礎培養基混合後倒入培養皿中。凝固後，加入壹薄層基本培養基，不含細菌。培養後，在培養皿底部標記生長的菌落。然後再加壹層完全培養基，培養後新出現的菌落大部分是營養缺陷型的(圖3-31)。該方法適用於兼性厭氧菌。
c)影印法將天鵝絨包裹在直徑小於平皿的圓柱形桌子上，固定，作為影印接種工具，滅菌備用。將誘變消除的野生型菌液塗布在完全培養基表面，培養。菌落生長時，用影印接種工具輕輕壓在這個平板上，再壓在另壹個基本培養基平板上。在基本培養基上不長，但培養後在完全培養基的相應部分上生長的菌落是營養缺陷型。
(4)營養缺陷型的鑒定——生長譜法:將檢測到的營養缺陷型菌株接種在完全培養基上培養，將生長的菌體或孢子洗凈，離心洗滌，制成濃度為107/ml ~ 108/ml的菌懸液。取0.1ml此懸液與基礎培養基混合，倒入培養皿中，濃縮稍幹，然後加入不同區域沾有各種營養物質的圓形濾紙片，培養，觀察生長反應。
在篩選營養缺陷型的過程中，必須註意表型延遲。由於誘變劑壹般只作用於單鏈DNA，突變無法體現在當代表型上，需要DNA復制和細胞分裂才能使表型發生突變，這種現象稱為表型延遲。
2.抗生素敏感細菌營養缺陷型突變體的富集和分離方法在原養型培養基(即缺乏營養缺陷型所需營養物質的培養基)中加入抗生素，可以殺死正在生長的野生型細胞，但不能生長的突變體得以幸免。