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hpaepic細胞用什麽培養基?

培養基的選擇:

細胞培養是實驗室最常見、最基礎的實驗,但不是最簡單的。不要小看細胞培養,這裏有壹個很大的問題。有時候細胞狀態不好,沒辦法做轉染、藥物篩選等實驗。影響細胞培養的因素很多。先說培養基和血清。

◆ MEM是從Eagle的基本培養基(BME)發展而來,其中成分的範圍和濃度都增加了。

◆改良的BEM(DMEM)培養基是為小鼠成纖維細胞設計的,現在常用於培養貼壁細胞。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的四倍。HCO3-和CO2的雙濃度起到了更好的緩沖作用。最初的配方中,葡萄糖含量為1000 mg/L,後來為了某些細胞的生長,葡萄糖含量調整為4500 mg/L,這就是人們常說的低糖高糖。

◆ aMEM含有額外的氨基酸、維生素、核苷和脂肪酸,可廣泛應用於各種細胞類型,包括對營養成分有嚴格要求的細胞。

Ham的F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的,現在廣泛用於克隆形成率和原代培養的分析。F12也可與DMEM等體積混合,得到高濃度、成分多樣的產品。這種培養基已經用於許多更難培養的原代培養和細胞系。

◆ RPMI 1640培養基是專門為淋巴細胞培養設計的,已廣泛用於懸浮細胞培養。

準備幾種培養基,然後花兩周左右的時間做壹個簡單的細胞生長實驗,選出最適合的。

以前大部分實驗室都是用幹粉培養基,但是配制過程比較復雜,在溶解、調pH、過濾的過程中可能會出現壹些濃度誤差,而且有些實驗室的水質也不理想,所以培養效果會有所不同。

血清的選擇:

含生長因子的血清能促進細胞增殖,含粘附因子的血清能促進細胞粘附,還具有抗胰蛋白酶活性。血清也是礦物質、脂類和激素的來源。最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清。牛血清是根據采血時間來分類的。采血時間越早,營養越豐富,抗體越少,所以胎牛血清適合要求高的細胞系和克隆培養。

血清批次之間的差異是不可避免的,來源於不同的制備方法和滅菌方法、動物的年齡差異和血清的保存條件,與采血動物的來源密切相關。不同的牧場,不同的氣候和其他環境因素都可能影響血清的質量。所以,如果妳選擇了壹種血清,就要盡量用久壹點。需要更換時,也應盡可能與原批次血清相似。現在很多公司都提供血清儲備。壹旦選定了某壹批次的血清,最好儲備夠用壹年,可以避免很多麻煩。

血清是細胞培養中不可或缺的成分,但不同批次的血清差異較大。更換血清時,需要進行大量的檢測,以確保更換的血清與原來的血清相似。血清的供應也是壹個必須考慮的因素。

無血清培養基,通常表示為SFM,顧名思義,是指細胞培養中不需要添加血清,但在某些應用中可能會添加生長因子或細胞因子。在無血清培養基中加入血清的主要成分,如粘附因子、生長因子、必需營養素、激素等,可以減少上述血清帶來的不利因素,使細胞培養的條件更加穩定。但它並不完美,從含血清培養過渡到無血清培養的條件也沒有想象中那麽直接。處於不同分化發育階段的細胞(例如,與定向前體細胞相比)需要不同的配方,生長因子和細胞因子的選擇尤其重要。而且在去除血清的同時,也去除了壹些血清蛋白的保護和解毒作用,所以對試劑和水的純度以及儀器的清潔度要求更高。另外,它的價格比普通培養基貴很多。

這麽多種,選擇起來也很頭疼。除了壹些公開配制的培養基,如培養內皮細胞的MCDB 131(適馬),大多數液體培養基都是有專利的,也就是說,其中的成分是保密的。然後妳只能搜索文獻,找供應商推薦,然後用自己的細胞做幾次繼代培養,選出最合適的培養基。畢竟實踐出真知。

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