傳統腫瘤標誌物
癌胚抗原(CEA)和傳統的腫瘤標誌物，即糖類抗原72-4 (CA 72-4)、糖類抗原19-9 (CA 19-9)、糖類抗原15-3 (CA 15-3)和糖類抗原65438。雖然可以發現它們的水平在胃癌中增加，但它們既不敏感也不特異，它們通常在疾病的晚期增加。
胃粘膜萎縮的標誌
胃蛋白酶原
胃蛋白酶原可作為血液中胃粘膜變化的間接標誌。胃蛋白酶原I (PgI)和胃蛋白酶原II (PgII)這兩種同工酶在胃的不同部位產生。胃蛋白酶原ⅰ的產生限於胃的泌酸腺(近端胃)，而胃蛋白酶原ⅱ廣泛存在於全胃的不同類型的腺體和十二指腸的Brunner腺中。粘膜炎癥和幽門螺桿菌感染的存在可能會增加胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II的水平，在某些情況下，當存在萎縮和炎癥時，胃蛋白酶原I值將是正常的。考慮到這壹缺點，胃蛋白酶原I與胃蛋白酶原II之比(胃蛋白酶原I/胃蛋白酶原II)的降低被認為是胃萎縮的最佳血清學標誌。
應當認識到，胃蛋白酶原檢測使用不同的方法(乳膠凝集、ELISA、化學發光酶免疫測定)。雖然不同方法得到的結果之間有很好的相關性，但結果在絕對數上可能不同。因此，必須針對所使用的方法具體確定臨界值，並且可以在不同的人之間進行調整。
壹些薈萃分析解決了胃癌檢測中胃蛋白酶原檢測的準確性問題。初步薈萃分析包括42個數據集，包括涉及296，553人的基於人群的篩查研究。包括許多來自亞洲，主要是日本的研究。在評估胃蛋白酶原檢測胃癌的性能時，考慮了25項研究。胃癌的敏感性和特異性分別為77.3%和73.2%。另壹項薈萃分析納入了1520例胃癌病例。結果表明，胃蛋白酶原ⅰ/胃蛋白酶原ⅱ檢測癌癥的敏感性和特異性分別為0.69和0.73。
胃泌素17
最近，提出了壹種額外的標記物來表征胃竇的萎縮:胃泌素17 (G-17)，因為它只由器官這壹部分的G細胞分泌。當胃竇萎縮時，G-17的水平預計會降低。但是，萎縮受試者的水平可以得到補償而提高。此外，循環G-17水平對生理刺激敏感，包括食物和藥物的攝入(如質子泵抑制劑)。這將把胃竇萎縮的測試值降低到遠低於篩查測試的可接受靈敏度的水平。近端和遠端局部胃癌之間的G-17水平沒有差異。因此，目前該指標在胃癌篩查中的作用有限。
G-17常與胃蛋白酶原和幽門螺桿菌血清抗體檢測聯合使用。薈萃分析總結了萎縮性胃炎的研究結果，但沒有針對胃癌的檢測。分析涉及42，465，438+0受試者，合並的敏感性為74.7%，萎縮的特異性為95.6%。
自身免疫性胃炎的標誌
自身免疫性胃炎患者發生胃癌的風險增加，因此建議對這些人進行識別和監測。雖然自身免疫性胃炎的血清學檢測在常規中被廣泛使用，但對於這種情況沒有無創檢測策略的“金標準”。
胃壁細胞抗體(APCA)是質子泵A和B亞單位的靶點，也被認為是胃黏膜萎縮的標誌。胃壁細胞抗體被認為是自身免疫性胃炎的標誌，胃壁細胞抗體的存在與胃體萎縮有關。它們可能先於胃炎表現為惡性貧血。
內源性因子(IF)是由位於胃體和胃底的壁細胞(泌酸細胞)產生的糖蛋白。抗IFA壹直被認為是惡性貧血的標誌，出現在萎縮性胃炎的晚期。抗IFA似乎非常特異，但它對萎縮性胃炎的檢測不太敏感。
因此，目前對自身免疫性胃炎及相關疾病的診斷策略包括上述血清學標誌物和巨細胞貧血的存在、低維生素B12水平的檢測、幽門螺桿菌狀態和胃粘膜的組織學評價。
新興的血液生物標誌物
在過去十年中，出現了各種其他基於血液的生物標記測試，通常稱為液體活檢。液體活檢用於分析癌細胞或源自癌細胞的分子的血液或其他生物液體樣品。它們是傳統組織活檢的壹種非常有前途的替代方法，可用於癌癥的早期檢測和隨後的預後，監測疾病進展和跟蹤腫瘤演變。液體活檢中最常見的分析物是循環腫瘤細胞(CTC)和循環無細胞核酸，包括循環腫瘤DNA、甲基化標記物、無細胞mRNA、miRNA、lncRNA和其他RNA種類。最近，細胞外泡(EV)已成為液體活檢的癌癥衍生生物標誌物的替代來源。
循環腫瘤細胞
循環腫瘤細胞是從原發性或轉移性腫瘤脫落到癌癥患者外周血中的播散性癌細胞。它們可以以單個細胞或2-50個癌細胞簇的形式存在，並代表血液轉移的重要步驟。盡管幾項研究壹致證明循環腫瘤細胞的計數和/或分子分析可用於預測胃癌患者的總體和無進展生存期並監測治療反應，但目前，它們與胃癌早期檢測的相關性仍有爭議。循環腫瘤細胞是壹種罕見的異質性腫瘤細胞群；因此，不同的循環腫瘤細胞檢測方法產生不同的檢出率。許多研究表明，胃癌患者血液中循環腫瘤細胞的檢出率和數量低於其他癌癥，如前列腺癌或乳腺癌，這構成了使用它們進行早期檢測的生物屏障。使用CellSearch系統(美國Manalini Silicon Biosystems)，研究人員發現，只有三分之壹的可切除胃癌患者在每7.5毫升血液中含有至少1個循環腫瘤細胞。使用基於大小的分離技術，發現循環腫瘤細胞的檢出率在I期和II期胃癌中分別為33.3%和50%。另壹項研究表明，轉移性疾病患者的循環腫瘤細胞數量明顯高於非轉移性疾病患者，且與腫瘤晚期的分期有關。同時，使用被稱為“FAST disk”的離心微流體系統，其基於通過膜孔對循環腫瘤細胞的大小選擇性分離。80%的T1和N0胃癌患者檢測到循環腫瘤細胞。基於過濾和上皮及間充質轉錄物的探針的多重RNA原位雜交顯示，在胃癌患者血液中發現的大多數循環腫瘤細胞具有間充質表型。上皮細胞和間充質細胞同時計數時，淋巴結陰性胃癌的檢出率為77.3%，無遠處轉移患者的檢出率為83.3%。具有間充質表型的循環腫瘤細胞不能通過基於捕獲表達上皮標記物(例如EpCAM或細胞角蛋白)的細胞的方法來檢測，因此在使用CellSearch系統或類似方法的研究中，循環腫瘤細胞的數量可能被低估。總之，最新的研究表明，循環腫瘤細胞可能具有早期檢測胃癌的潛在用途，捕獲和分析異質循環腫瘤細胞群的新方法值得進壹步研究。
循環腫瘤DNA
DNA片段從體內不同類型的細胞中釋放到循環系統中。在癌癥患者中，部分無細胞DNA (cfDNA)來自腫瘤細胞，稱為循環腫瘤DNA (ctDNA)。循環腫瘤DNA可用於檢測腫瘤細胞中的體細胞點突變、重排、拷貝數變異和甲基化標記，因此可用於癌癥的無創檢測，監測治療反應和疾病進展，以及跟蹤腫瘤中的異質性和演變。已經在晚期和早期癌癥患者中檢測到循環腫瘤DNA，但是循環腫瘤DNA在早期癌癥患者的總文庫中的比例通常非常低，這代表了使用循環腫瘤DNA進行早期癌癥檢測的主要技術挑戰。大多數關於循環腫瘤DNA的研究使用基於PCR的方法或基於NGS的方法。
液滴數字PCR (ddPCR)允許對生物流體樣品中含有突變的DNA片段進行絕對定量，檢測限低於野生型等位基因背景中0.1%的變異等位基因得分(VAF)。是追蹤已知點突變和拷貝數變異的首選，比如患者HER2擴增已確診胃癌。然而，它需要腫瘤突變的先驗知識，因此它在早期檢測或篩查中的潛力有限。
相反，基於NGS的方法允許檢測循環腫瘤DNA中的腫瘤特異性遺傳或表觀遺傳變化，而無需預先知道腫瘤中存在的變化，因此其對於檢測癌癥的存在和跟蹤癌癥的克隆進化、治療期間的癌癥或疾病進展具有潛在相關性。而傳統NGS方法的檢測限約為65438±0% VAF，在循環腫瘤DNA比例相對較高時足以追蹤晚期疾病中的腫瘤突變，但如果循環腫瘤DNA比例較低則不適用。因此，基於NGS的技術需要優化和改進以用於早期癌癥檢測。最近，壹些新的基於NGS的血液測試已經被開發用於檢測可切除的癌癥。
CancerSEEK是壹種血液測試，可以通過評估循環蛋白水平和循環腫瘤DNA突變來檢測八種常見的癌癥類型，包括胃癌。該試驗在1005名患有卵巢癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、食道癌、結腸直腸癌、肺癌或乳腺癌的可切除I-III期癌癥患者和812名健康個體中進行。結果表明，檢測卵巢癌和肝癌的靈敏度為98%，檢測胃癌的靈敏度為70%左右，特異性大於99%。重要的是，CancerSEEK測試可以在63%的情況下正確識別癌癥的解剖位置(並在83%的情況下定位兩個可能的解剖位置)。
另壹種最近開發的血液測試稱為PanSeer，它基於通過靶向亞硫酸氫鹽測序檢測循環腫瘤DNA中的癌癥特異性甲基化模式。該測試詢問了595個已知含有不同甲基化CpG位點的基因組區域，這些位點可以區分癌癥和健康組織。當應用於診斷後的血漿樣本時，它可以檢測五種常見的癌癥(胃癌、食道癌、結直腸癌、肺癌或肝癌)，靈敏度為88%，特異性為96%，而不考慮它們的來源。此外，早期和晚期癌癥的敏感性是相似的。接下來，對605名無癥狀個體(其中191人在抽血後四年內被診斷患有這些癌癥類型中的壹種)的檢測顯示，診斷前血漿樣本的靈敏度為95%。因此，這項研究表明，在使用標準護理方法進行診斷之前，包括胃癌在內的常見癌癥可以檢測長達四年。
另壹個必須考慮的方面是，cfDNA的壹小部分遺傳變化可能來自於年齡相關的克隆性造血擴增。因此，開發了壹種策略來區分循環腫瘤中的DNA變化和與克隆性造血相關的變異。對50例可切除胃癌(>:30 000)患者匹配的cfDNA和白細胞進行靶向深度測序，結果顯示62%的患者存在源於白細胞的序列改變。重要的是，白細胞中最常受影響的基因是DNMT3A (45%)、TP53 (29%)、EGFR (10%)、APC (6%)等常見的癌癥基因，這些突變的中位數VAF為0.31%，與癌癥特異性變異相似。在過濾了源於白細胞的變異後，54%的患者在cfDNA中發現了癌癥特異性突變，這與術後疾病復發密切相關。
總之，最近的研究表明，通過循環腫瘤DNA分析來檢測早期胃癌是可行的，最近發展的壹些檢測方法顯示出非常高的靈敏度和特異性。然而，需要去除源自白細胞克隆擴增的雜合序列變異，以識別真正的癌癥衍生的序列變異，並且在將這種檢測整合到常規臨床實踐之前，應該證明其臨床實用性。
無細胞RNA
2008年，壹項原則研究證明，miRNA從癌細胞釋放到血液中，在那裏它們受到保護，不會降解，並容易通過基於PCR的方法檢測到。同時，人血清中含有不同的疾病特異性miRNA模式，這些模式在健康對照組中不存在，表明幾種疾病可能會在患者血液中留下特定的miRNA指紋。此後，在癌癥患者的各種生物體液中研究了個體miRNA或miRNA特征的水平，其與疾病狀態、階段、侵襲性和對治療的反應有關。大約有100個出版物報道了在胃癌患者中檢測到循環無細胞miRNA。這些研究中的壹些報道了miRNA面板的鑒定，其顯示了非常高的診斷價值。
然而，在許多研究中，少數mirna顯示了壹致的結果，而許多其他mirna報告了矛盾的結果。結果不壹致和重復性差的主要原因是隊列規模小、缺乏前瞻性研究的驗證、RT-QCPR結果的不同標準化方法以及血樣采集和處理的可變條件。
最近，發表了壹項廣泛的三階段研究，以解決早期研究的缺點。在第壹階段，通過RT-QCPR對236例胃癌病例和236例匹配的對照受試者中的578個候選miRNA進行定量。在第二階段，在兩個AUC為0.92的獨立病例對照隊列中(I-II期胃癌的AUC為0.91)，選擇並驗證了AUC最高的壹組12 miRNA，分別有89和121受試者。最後，在4566名接受胃鏡檢查和基於血清的胃癌檢測生物標誌物測試(幽門螺桿菌血清學、胃蛋白酶原I/II、Pg指數、CEA和CA19-9)的參與者的前瞻性驗證隊列中，制作並驗證了臨床級12-miRNA測試。12-miRNA組區分胃癌和健康對照組，AUC為0.848(敏感性為87%，特異性為68.4%)，而其他生物標誌物測試顯示AUC範圍為0.647(ABC方法)至0.576(Pg指數和CEA)。因此，該檢測方法明顯優於目前已有的檢測方法，有可能作為胃癌的風險評估工具和高危人群的篩查工具。
此外，許多研究已經探索了使用其他RNA物種的可能性，如mRNA、長鏈非編碼RNA (lncRNA)和環狀RNA (circRNA)作為基於血液的胃癌的生物標誌物。這些研究中的壹些已經確定了RNA生物標誌物的特征，其顯示出與上述miRNA組相似的診斷性能。例如，分析匹配的術前和術後血漿、5名胃癌患者的腫瘤和正常胃組織中的lncRNA的檢測結果導致鑒定5-lncRNA指數，然後在321受試者中測試該指數，該指數可用於區分胃癌和健康對照，以及區分胃癌和癌前病變。術後lncRNA指數下降，說明血漿中這些RNA的主要來源是腫瘤組織，適用於監測腫瘤動態。綜上所述，這些研究提供了各種編碼和非編碼RNA從癌組織釋放到血液中的原理證明，但需要大規模的前瞻性臨床研究，並與現有的生物標誌物進行比較，以評估其臨床療效。
細胞外小泡
“胞外小泡”是指從細胞中自然釋放到胞外空間的各種膜結合小泡，包括外泌體、小泡和雕亡小體。細胞外小泡包含各種蛋白質、脂質、代謝物、編碼和非編碼RNA，甚至DNA片段。在包括胃癌在內的各種癌癥患者的生物液體中，細胞外小泡的水平增加，但是仍然不清楚這些細胞外小泡是由癌細胞自身產生的還是代表對疾病或治療的系統性反應。此外，在患有各種非癌癥疾病和生理應激條件的患者的血液中，細胞外小泡的水平增加，因此細胞外小泡的水平本身似乎不是癌癥的高度特異性的生物標誌物。細胞外泡可能是液體活檢中癌癥衍生生物標誌物的來源。與循環腫瘤細胞、ctDNA或基於cfRNA的液體活檢相比，胞外小泡可能具有幾個優勢:(I)胞外小泡比循環腫瘤細胞更豐富，因此可能更好地反映腫瘤內部的異質性；(ii)它們保護其產品免於降解，因此它們可能是比總血漿或血清更穩定的cfDNA和RNA來源，以及(iii)它們包含使人想起其母細胞的分子特征，並且可能富含低豐度但高特異性的癌癥生物標誌物。
總結:
傳統的腫瘤標誌物(如CEA、CA 19-9、CA 72-4等。)不推薦作為早期胃癌無創檢測的獨立檢測指標。
研究最多的胃癌前病變標誌物是胃蛋白酶原(Pg I，Pg I/II)。然而，這些標記不能被視為癌癥檢測，但可以用於識別和監測風險增加的人。應該對癌前病變的檢測進行額外的研究，以提高靈敏度。
基於癌癥特異性甲基化模式、循環蛋白和循環腫瘤DNA突變以及miRNA面板檢測的各種組合的方法已被證明是有前景的結果，這使它們更接近實踐，而基於循環檢測的腫瘤細胞、細胞外囊泡和無細胞RNA的檢測需要更廣泛的研究。
簡而言之，對胃癌或高危癌前病變的完美檢測方法的需求尚未得到滿足，需要更多的研究來滿足這種需求。目前早期胃癌的診斷仍需胃鏡確診，其他方法並不可靠。